En la microbiología el examen microscópico
es generalmente el primer paso que se da para la
identificación de un organismo desconocido; pero el
tamaño de la mayoría de las células
bacterianas es tal que resulta difícil ver con el microscopio
óptico, principalmente por la falta de contraste entre
la
célula y el medio que la rodea.
Se ha hablado de preparaciones de bacterias
vivas, no coloreadas, que no permiten observar la movilidad, pero
que sobre otros hechos morfológicos de importancia como
tamaño, formas, agrupación de las células,
posesión de estructuras
especiales, como endosporas, flagelos, cápsulas y
gránulos intracelulares, no arroja resultados importantes.
La forma más simple de aumentar el contraste entre las
células y el medio que las rodea es por medio de la
utilización de colorantes, de acuerdo con su morfología
y las reacciones tintoriales de un organismo se pueden ver los
grupos en los
que están clasificadas las bacterias
Los microorganismos son organismos microscópicos
constituidos por una sola célula o
agrupación de células, incluyendo los virus.
Sarcina:
El género
sarcina comprende dos especies de bacterias que
se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes
de ocho o más células. Las sarcinas son anaerobios
obligados y son extremadamente ácido – tolerantes,
pudiendo fermentar azúcares y crecer a pH inferior a
2. las células de las especies sarcina ventriculi,
producen una capa de celulosa gruesa y fibrosa alrededor de la
pared celular. Las capas de celulosa de las paredes adyacentes se
adhieren entre sí y funcionan como un cemento
mantiene juntas paquetes de células de S. Ventriculi.
Sarcina puede aislarse del suelo, barros,
heces y del contenido del estomago. Debido a su extrema
ácido – tolerancia, S.
Ventriculi es una de las pocas bacterias que pueden sobrevivir en
el estomago humano y en el de otros animales
monogástricos. Se ha observado un crecimiento
rápido de este organismos en estómagos de personas
que padecen determinadas infecciones gastrointestinales que
producen un retraso en el paso del alimento al intestino como las
ulceras pilóricas.
Escehrichia Coli:
Los miembros del género
escherichia son habitantes casi universales del tracto intestinal
de los humanos y de los animales
homeotermos, aunque no son de ninguna manera los organismos mas
abundantes en dichos hábitats. Escherichia puede
desempeñar una función
nutricional en el tracto intestinal mediante la síntesis
de vitaminas,
especialmente de vitamina K. Como aerobio facultativo, este
organismo probablemente también ayuda a consumir oxígeno, convirtiendo el intestino grueso
en anóxico. Las cepas silvestres de escherichia coli casi
nunca muestra
requerimientos de ningún factor nutricional y pueden
crecer a partir de una gran variedad de fuentes de
carbono y de
energía como azúcares, aminoácidos, ácidos
orgánicos, etc. Existen cepas patógenas; algunas
pueden causar diarreas infantiles, que alcanzan proporciones de
epidemia en guarderías o en departamentos de obstetricias.
Escherichia causa también infecciones del tracto urinario
en personas de edad avanzada o en aquellas cuya resistencia se
halla debilitada por tratamientos quirúrgicos o por la
exposición a radiaciones ionizantes. Cada
vez mas frecuentemente la participación de cepas
enteropatógenas de E. Coli en infecciones parecidas a la
disentería y en fiebres generalizadas como se ha indicado,
estas cepas forman el antígeno K, que permite la
adherencia y la colonización del intestino delgado, y una
enterotoxina responsable de los síntomas de la
diarrea.
Bacillus Cereus:
Los miembros del género bacillus pueden aislarse
fácilmente del suelo o de
partículas de polvo en suspensión y son uno de los
organismos más corrientes cuando se siembran por
estrías muestras de suelo en placas que contengan
diferentes medios
nutritivos. Los formadores de esporas pueden aislarse
selectivamente a partir del suelo, de los alimentos o de
otros materiales,
dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos; este
tratamiento destruye completamente las células
vegetativas, mientras muchas de las esporas presentes se
mantienen viables. Si estas muestras pasteurizadas se siembran
por estría en placa y se incuban aeróbicamente, las
colonias que se desarrollan son casi exclusivamente del
género bacillus. Los bacillus pueden crecer bien en
medios
sintéticos que contengan azúcares, ácidos
orgánicos, alcoholes,
etc., como única fuente de carbono, y
amoniaco como única fuente de nitrógeno. Algunos
aislados sin otros requerimientos vitamínicos. Muchos
bacillus producen enzimas
hidrolíticas policelulares que degradan
polisacáridos, ácidos nucleicos y lípidos,
lo que permite a estos organismos usar dichos productos como
fuente de carbono y donadores de electrones. Muchos bacilos
producen antibióticos, entre los cuales mencionaremos la
bacitracina, la plimixina, la tirocidina, gramicidina y la
circulina. En la mayoría de los casos la producción de antibióticos parece
guardar relación con el proceso de
esporulación; el antibiótico se libera cuando el
cultivo alcanza la fase estacionaria de su crecimiento, tras lo
cual inicia la esporulación.
Cocos:
Con la excepción de los deinococcus, todos los
organismos gram positivos del dominio bacteria
forman un grupo
filogenéticamente coherente. Sin embargo del estudio de
las secuencias del RNA ribosómico, emergen dos grupos
principales: el subgrupo de Clostridium, que conforman los
formados de endosporas, las bacterias del ácido
láctico y la mayor parte de los cocos gram positivos
(estos organismos tienen un porcentaje molar de GC bastante bajo
en su DNA), y el subgrupo de los Antinomycetes, que consiste
básicamente en géneros de actinomicetes cuya mayor
parte tiene un porcentaje elevado de GC, y el género
propionibacterim. Empezaremos con los cocos gram positivos que
incluyen bacterias de características fisiológicas muy
distintas. No se consideran aquí el género de
Streptococcus.
Staphylococcus Aureus:
Es un organismo aerobio con un metabolismo
respiratorio típico. Son catalasa positivos y esta prueba
permite diferenciarlos del Streptococcus y de algunos otros
géneros de cocos gram positivos. Los Staphylococcus pueden
separarse fácilmente a partir de las pruebas de
oxidación – fermentación (O / F). Es un organismo
facultativo y produce ácido a partir de glucosa, tanto
aeróbicamente como anaeróbicamente. Su
composición de base del DNA también es muy
distinta. Tienen un porcentaje de GC bastante bajo. Los
Staphylococcus son parásitos habituales de los humanos y
otros animales que pueden causar infecciones graves. En los
humanos se conocen dos formas principales; Staphylococcus
epidermis, forma no pigmentada y no patógena, que vive en
la piel y en
membranas mucosas, y Staphylococcus Aureus, una forma pigmentada
amarilla que está asociada corrientemente a situaciones
patogénicas, incluyendo granos y forúnculos,
neumonía, osteomielitis, meningitis y artritis.
Levaduras:
Son hongos
unicelulares y la mayoría son ascomicetos. Normalmente son
células ovales o cilíndricas y la división
es habitualmente por gemación. Durante el proceso de
gemación se produce una gema que aumenta de tamaño
gradualmente y se separa de la célula
madre. Las levaduras normalmente no desarrollan un micelio, sino
que permanecen en estado
unicelular durante todo el ciclo de crecimiento. Sin embargo
algunas pueden filamentar. Las células de levaduras son
mucho mas grandes que las bacterianas y pueden distinguirse no
solo por su tamaño sino por la presencia de elementos
intracelulares tales como el núcleo. Algunas levaduras se
reproducen sexualmente mediante apareamiento "mating",
originándose un zigoto y eventualmente ascosporas
.
Las levaduras normalmente prosperan en hábitats
con abundante azúcar,
tales como frutas, flores e incluso las cortezas de árboles. Las levaduras más
importantes desde el punto de vista comercial son las cepas
cerveceras y panaderas de la especie Saccharomices Cevericiae,
que es el hongo mejor conocido por ser fácilmente
manipulable y constituir un modelo
excelente para el estudio de problemas
importantes que conciernen a la biología de
eucariotas.
Las técnicas
de tinción son muy importantes para el estudio de
microorganismos inertes. Para las técnicas
de tinción se aplica un colorante simple (un solo
colorante) o diferencial (dos o mas colorantes)
Existen varios tipos de tinciones, pero las estudiadas
fueron: tinción de Gram, tinción simple y
tinción de esporas.
Tinción de Gram:
Está dividido en gram positivo y gram negativo.
El organismo estudiado para gram positivo fue la Sarcina ya que
manifestó una tonalidad violeta debido a que fijó
en su estructura el
cristal violeta como colorante. El microorganismo estudiado para
gram negativo fue, Escherichia Coli, debido a que mostró
una tonalidad rosada porque fija el colorante
safranina.
Este tipo de tinción presenta un interés
especial por su importancia en taxonomía
bacteriana. Con este procedimiento de
tinción se constituye el punto de partida de cualquier
procedimiento
de identificación de bacterias.
Tinción Simple:
Se estudiaron levaduras, en este experimento se
utilizó un solo colorante que fue azul de metileno. Se
pudo observar que estas levaduras estaban contaminadas con cocos;
estas células bacterianas difieren desde el punto de vista
químico de su medio externo y por eso se tiñen
contrastando con su alrededor.
Tinción de Esporas:
A pesar del minúsculo tamaño de las
bacterias, con el uso correcto de las técnicas de
tinción es posible observar alguna de las estructuras
internas y anexas a las células bacterianas.
Particularmente las endosporas debido a que esta cuando
está formada es extremadamente resistente a los métodos
ordinarios de tinción para esto se utiliza una
técnica de tinción simple debido a que se colorea
toda la célula
excepto la espora, (célula vegetativa), mientras que la
espora permanece sin colorear y por lo tanto resalta a la vista.
El microorganismo estudiado fue el Bácillus Cereus
.
También en tinción de gram se
estudió microorganismo de Staphylococcus Aureus pero
debido a que se encontraba muy viejo, no tenía capacidad
de absorber calor.
Aunque las bacterias no aparecen muy diferentes del
medio que las rodea, difieren mucho químicamente esta
diferencia química es lo que
permite distinguir las bacterias por tinción, pues
generalmente, el colorante reacciona con la célula
bacteriana, pero no reacciona con su medio exterior.
Debido a eso la tinción es importante para la
microbiología debido a que:
- Proporciona contraste entre el microorganismo y el
medio que lo rodea, permitiendo diferenciar varios tipos
morfológicos. - Permite el estudio de las estructuras internas de la
célula bacteriana, tales como paredes celulares, vacuola
o cuerpos celulares. - permite el empleo de
mayores amplificaciones.
Documento cedido por:
JORGE L. CASTILLO T.