Evaluación de la actividad in vitro e in vivo de tinturas de Eucalyptus spp.

1. Resumen
3. Materiales y
   métodos
4. Análisis
   estadístico
5. Valoración
   económica
6. Resultados y
   discusión
7. Referencias.
8. Anexo

Su uso como antisépticos
mamarios

Resumen

En una primera fase se evaluó la actividad
antibacteriana in vitro de tinturas de cortezas de
Eucalyptus citriodora Hook y Eucalyptus saligna Sm.
sobre 2 cepas de Staphylococcus aureus (referente y
salvaje). La cepa autóctona resultó resistente a
penicilina, gentamicina e intermedia a estreptomicina. Los
extractos de Eucalyptus citriodora Hook (20 y 83%
de alcohol)
resultaron más eficaces que sus similares de E. saligna
Sm., y ambos superiores a los
antibióticos penicilina y gentamicina. No
hubo diferencia significativa en la sensibilidad de ambas cepas
hacia los extractos evaluados.

A partir de dichos resultados se seleccionó la
tintura (20% de etanol) de Eucalyptus citriodora Hook (5
g/L) para el tratamiento de ganado vacuno de ordeño
afectado de mastitis
subclínica. Se aplicaron 5 mL de la tintura por vía
intramamaria durante 7 días. El reactivo de Schlam
posibilitó la detección de la enfermedad y su
evolución durante el tratamiento de 44
cuartos correspondientes a 18 animales. La
tintura ejerce una acción
curativa a partir de las 72 horas, resulta de fácil
elaboración y económica con respecto a las otras
opciones de tratamiento.

Palabras claves: mastitis; antisépticos
mamarios; Eucalyptus; Eucalyptus
citriodora.

Introducción

En términos de pérdidas económicas
la mastitis es la enfermedad más importante de la industria
ganadera debido a la gran disminución en la producción láctea y pérdida
de cuartos glandulares afectados. Cálculos recientes
revelan que la afección representa el 30% del costo total de
todas las enfermedades padecidas por
el ganado vacuno que, por este concepto,
ascienden a 2000 millones de dólares en Estados Unidos
(Armenteros, 2000).

Desde que Franck (1876, citado por Heidrich y Renk,
1978) demostró que las mastitis eran producidas por
agentes microbianos, los esfuerzos terapéuticos se
encaminaron a la aplicación intracisternal de productos para
eliminar dichos gérmenes y lograr la curación de la
mama. A tal fin se aplicaron soluciones de
fenol, alumbre, ácido bórico-alcanfor, cresol,
glicerina, etc. que, aunque dieron buenos resultados
terapéuticos, afectaban la mama tratada o inutilizaban su
capacidad productora de leche
(Heidrich y Renk, 1978). La era antibiótica del pasado
siglo abrió nuevas perspectivas. Los mismos, sin embargo,
constituyen un residual que ejerce gran influencia en la calidad de la
leche, sus derivados y la incidencia en la salud pública,
además de potenciar la emergencia de cepas
antibiorresistentes (Barreto et al., 1991; Mediavilla
et al., 1997; Armenteros, 2000).

Durante milenios el hombre se
ha valido de las plantas para
combatir las más diversas enfermedades (Roig, 1974).
Eucalyptus constituye un género
bien distribuido en Cuba y que en
los últimos años ha sido empleado con diversos
fines en medicina
veterinaria y
humana (Bertha Velázquez et al., 1991; Barreto
et al., 1993ª, b, c, 1995ª, b, 2005). Se ha
comprobado que posee propiedades antibacterianas in vitro
frente a Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli,
Spaphylococcus aureus y Streptococcus agalactiae
(Yadila Gómez et al., 1994; Castell et al.,
1994; Barreto et al., 1995a, b, 2005, 2006). Todas las
especies mencionadas poseen potencialidad para provocar mastitis,
fundamentalmente las dos últimas (Planas,
1979).

Tomando en cuenta lo antes expuesto se establecieron los
siguientes objetivos para
esta investigación:

2. Evaluar la acción in vitro de tinturas
   (83% y 20%) de cortezas de Eucalyptus citriodora
   Hook. y Eucalyptus saligna Sm sobre cepas de
   Staphylococcus aureus.
3. Comparar in vitro la actividad antibacteria de
   dichos extractos frente diversos
   antibióticos.
4. Aplicar la tintura más efectiva in
   vitro a vacunos de ordeño con mastitis
   subclínica para evaluar su potencial antiséptico
   in vivo.
5. Determinar los costos de este
   último debidos a: elaboración y tratamiento con
   respecto a los ocasionados por los tratamientos
   convencionales.

Materiales y métodos

Colecta

Las cortezas de Eucalyptus citriodora Hook (17
años) y Eucalyptus saligna Sm (26 años) se
colectaron durante las primeras horas de la mañana en
la Empresa de
Investigación Forestal de Camagüey. Las muestras se
tomaron a una altura de 1m con respecto al suelo. En todos
los casos poseían un color uniforme y
estaban libres de musgos.

Procesamiento

Ambas cortezas se secaron en estufa con
recirculación de aire a 90 ºC
durante 72 horas. La molienda se realizó en un molino de
cuchillas. El polvo obtenido fue envasado en bolsas de nylon
selladas hasta su utilización.

Obtención de los extractos

Todos los extractos se obtuvieron por
percolación, usando como menstruo mezclas
hidroalcohólicas al 20 y 83%. Para ello se emplearon 1000
mL de solvente/50g de corteza molida. El material se
maceró 24 horas previo a la percolación. Durante el
proceso se
adicionó solvente limpio hasta obtener los
volúmenes deseados.

Cepas

En la evaluación
de la actividad antimicrobiana se utilizaron 2 cepas de
Staphylococcus aureus: ATCC 29740 (referente) y una cepa
salvaje aislada de una vaca con mastitis
clínica.

Medio de cultivo

En todos los ensayos se
empleó agar Mueller Hinton (15 mL en placas de 100 mm de
diámetro).

Evaluación in vitro

La actividad antimicrobiana de las tinturas se
estableció mediante el método de
difusión sugerido por Kirby y Bauer (Bio-Merieux, 1984).
Se utilizaron discos de papel de filtro Watman 3 impregnados con
cada tintura. Como controles se emplearon discos impregnados en
soluciones alcohólicas al 20 y 83%, respectivamente. A las
dos cepas utilizadas se les determinó su sensibilidad
frente a los antibióticos: cloranfenicol, ampicilina,
penicilina, eritromicina, estreptomicina, gentamicina,
kanamicina, tetraciclina y sulfametoxasol.

Selección de la muestra a
tratar

Ante la imposibilidad de infectar animales sanos con una
cepa conocida para inducir mastitis fue necesario realizar un
pesquizaje, mediante el método de Schlam o California,
para detectar animales con mastitis subclínica. A tal fin
se seleccionó la unidad San Lorenzo de la provincia Ciego
de Ávila. Se enviaron muestras de leche de los animales
positivos a este ensayo al
laboratorio
provincial de veterinaria.

Tratamiento

A cada animal se aplicó una dosis diaria
consistente en 5 mL por vía intramamaria durante el
ordeño de la tarde. El tratamiento tuvo una
duración máxima de 7 días. La acción
terapéutica se evaluó mediante la prueba de
Schlam.

Análisis estadístico

A los valores
que se obtuvieron en el estudio in vitro, se les
aplicó un análisis de varianza mediante el empleo del
programa
estadístico Sistat, en tanto que los obtenidos en el ensayo de
campo se procesaron según el método de
comparación de proporciones.

Valoración económica

Se realizó la valoración económica
en función
del costo de la tintura seleccionada para el ensayo in
vivo; el costo se comparó con el debido a tratamientos
convencionales para 5 días de
aplicación.