Viabilidad de Bufo paracnemis ante formol y dicromato de potasio

1.
Introducción

3. Aparato
urogenital
4. Hábitat y
comportamiento
5. Materiales y
métodos
6.
Resultados
7. Porcentaje de
mortalidad
8. Estadíos
alcanzados
9. Referencias

1.
Introducción

Gochez Alberto Martín; Spagnolo Emiliano; Peres
Luis Orlando; Peralta Nazareno; Najle Sebastian

El objetivo de
nuestra investigación, fue medir el rango de
viabilidad de embriones de Bufo paracnemis en las concentraciones
de formol y dicromato se debió primeramente reconocer las
principales características del aparato
reproductor y ensayar la manipulación de gametas y
fecundación asistida en los citados anfibios.

En nuestro trabajo hacemos un seguimiento a las fases de
la ontogenia que se pueden visualizar externamente controlando
ciertos factores externos tales como pH, temperatura,
cantidad de huevos por cubeta, composición química del solvente,
por lo que analizamos el tiempo de
crecimiento, el estadío alcanzado, el porcentaje de
muertos, y el patrón normal de desarrollo si
los factores no difieren mucho, de los encontrados por la
naturaleza;
con lo cual analizamos el crecimiento de los huevos bajo cambios
en la composición química del solvente en cubetas
de concentraciones graduales de formol y dicromato de potasio, y
calculamos el número de ovocitos muertos y estadío
alcanzado.

Suponemos que los estadíos de desarrollo de B.
paracnemis serán similares a los de B.
arenarum.

La mortalidad de los embriones expuestos a un agente
químico será directamente proporcional a la
concentración del mismo.

La velocidad de
desarrollo de los embriones expuestos a un agente químico
será igual a la observada en el control.

Hasta el presente no hay demasiados trabajos sobre la
biología
de Bufo paracnemis, y mucho menos sobre su desarrollo
embriológico. Esto se ve reflejado en lo dificultoso que
resultó hallar bibliografía sobre este anfibio. Por
lo tanto se considera de particular importancia la
realización de esta experiencia como aporte al conocimiento
del desarrollo
embrionario de Bufo paracnemis y los factores que interfieren
en el mismo. En este caso se utilizaron soluciones de
formol y dicromato de potasio que son considerados como
mutágenos químicos (Lacadena, J. R.,
1989)

Las características morfológicas y
ecológicas del material biológico en estudio son
las siguientes:

Bufo paracnemis es un anfibio robusto, con cabeza ancha,
hocico redondeado, casi triangular. Crestas cefálicas muy
fuertes y abultadas. Ojo mediano, con un pliegue sobre el
párpado superior. Tímpano visible. Parotoides muy
grandes y abultadas, aguzandose posteriormente. Machos con patas
delanteras desarrolladas, mano con reborde cutáneo;
tubérculos metacarpales desarrollados; los subarticulares
semidivididos. Pie con membrana interdigital hasta 1/3 y reborde
cutáneo; tubérculo metatarsal interno en forma de
azada, el externo redondeado. Pliegue tarsal afilado. Piel dorsal
áspera, con verrugas romas con puntas córneas,
vientre con gránulos poligonales con punta espinosa.
Glándula paracnemis (tibia) grande. Macho con saco vocal
externo poco visible y cayosidades nupciales oscuras. Dorso
amarronado o amarillento con manchas marrón oscuro
brillante, transversales. Parotoides rodeadas por machas oscuras
alargadas. Manchas oscuras borrosas en extremidades. Vientre y
garganta blancuzcos, densamente salpicados de oscuro. El
tamaño promedio del adulto es de 210 mm (W. S. Monografía
2, 1980).

El sistema
urogenital de este anfibio comparte las características
comunes a los de todos los anuros (ver figura 1), (Pirlot, P,
1976)

2. Morfologia
externa de Bufo paracnemis.

3. Aparato
urogenital

4.
Hábitat y comportamiento

Reproducción: desde primavera temprana hasta
verano tardío. Los huevos son puestos en largas ristras
gelatinosas adheridas a plantas
acuáticas.

Renacuajo: dorso gris azulado. Vientre blancuzco. Aleta
dorsal mas clara, casi opaca. Cola levemente mas larga que la
mitad del largo total. Ojos grandes, prominentes. Fórmula
dentaria 1,1-1/1-1,2.

Distribución: desde Jujuy hasta Córdoba y
Santa Fe, Corrientes, Entre Rios y
Misiones (ver anexo 1, figura 2) .Además en ambientes
secos de Bolivia,
Paraguay y
Brasil hasta
Pernambuco (W. S. Monografía 2, 1980).

Su ubicación taxonómica es la
siguiente:

Clase: Amphibia

Subclase: Lissamphibia

Orden: Anuro

Superfamília: Bufonoidea

Familia: Bufonidae

Grupo: Marinus

Género y especie: Bufo
paracnemis

(De Lucía, A; comunicación oral, 1999).

5. Materiales y
métodos

Dos días antes del comienzo de la experiencia
fueron colectados ejemplares macho y hembra de Bufo paracnemis,
los cuales se trasladaron al laboratorio
del área Morfología y Fisiología para que se les suministre a las
hembras una suspensión hipofisiaria (según el
protocolo de
Houssay, 1929) para inducir la ovulación.

Pasadas las doce horas, las hembras comenzaron a ovular,
tras haberse iniciado esto se desmedularon tanto los ejemplares
hembra como machos. A estos últimos se los disecó
para extraerles los testículos, los cuales fueron seccionados y
macerados en 1 ml de solución Ringer al 10 % (ver anexo 1,
tabla 1), retirando luego con una pinza los sobrantes de tejido y
para obtener así la suspensión
espermática.

Se colocaron los ovocitos contenidos en un ovisaco de
una de las hembras en una caja de Petri (perfectamente limpia y
seca), y se les agregó luego una primer dosis de
suspensión espermática. Transcurridos 10 minutos se
agregó 1 ml de solución de Ringer, al minuto
siguiente se agregó la segunda dosis de suspención
espermática preparada a partir del otro testículo
del macho. Quince minutos mas tarde fueron colocados los ovocitos
fecundados en un recipiente plástico, translúcido,
de medidas 25 x 12 x 5 cm., para luego ser cubiertos totalmente
con solución Ringer.

Simultáneamente se prepararon dos cubeteras de
plástico conteniendo soluciones de concentraciones
decrecientes de formol y dicromato de potasio. Estas soluciones
de diferente concentración fueron ordenadas de a pares en
los recipientes de las cubeteras, de forma que dos recipientes
contenían la misma concentración de agente
químico (ver figuras).

Sol. De Ringer Tris HCl 10% (pH 7,5):

Figura 2: Distribución de las soluciones en las
cubeteras.

Cubetera Con Formol

Concentraciones:

1: 4%

2: 2%

3: 1%

4: 0,4%

5: 0,04%

6: 0,004%

Cubetera CON
K2Cr2O7

Concentraciones:

1: 0,00003 gr/l

2: 0,0003 gr/l

3: 0,003 gr/l

4: 0,03 gr/l

5: 0,3 gr/l

6: 3 gr/l

Vale aclarar que los embriones no cumplimentaron su
desarrollo en el medio conteniendo los agentes químicos,
sino que este medio fue reemplazado a las 10 horas desde la
inseminación por solución de Ringer, ya que la
solución inicial sufrió una evaporación
excesiva. De igual modo, tanto las soluciones Ringer de las
cubeteras como la del control se reemplazaron
periódicamente para renovar el suministro de nutrientes y
evitar la putrefacción del medio.

Cuando los embriones alcanzaron el estadío de
"boca abierta" fueron alimentados con hojas de lechuga (Lactuca
sativa) y con hojas de una planta acuática
hervidas.

Los datos registrados
durante la experiencia fueron: registros de
temperatura ,con termómetro de mercurio; de pH con tiras
indicadoras de diferentes marcas;
porcentaje de muertos por recipiente de cría y
estadío máximo alcanzado al tiempo de muestreo.

Periódicamente se tomaron muestras
representativas de todos los recipientes que fueron fijadas y
conservadas en formol al 4%. Estas muestras fueron tomadas a
distintos intervalos de tiempo que fueron predeterminados (ver
tabla ).

Los esquemas fueron realizados a mano alzada, con lupa
Kyowa a 30x y 40x.

Las tablas fueron realizadas con el programa Excel
98.