Especificidad de la técnica HPLC para la evaluación de la estabilidad química del sólido pulverulento de Parthenium hysterophorus, Linn, en base a partenina

1. Resumen
2. Especificidad de la
   técnica analítica mediante Cromatografía
   Líquida de Alta Eficacia (HPLC) para la
   estabilidad
3. Preparación de las
   disoluciones de las muestras degradadas
5. Estabilidad
   acelerada y de vida estante
6. Especificidad
   de la técnica analítica HPLC para
   estabilidad
7. Cromatografía
   en capa delgada cualitativa (CCD)
8. Espectrofotometría
   ultravioleta directa

Resumen

En el Departamento de Farmacia de la UCLV se desarrollan
investigaciones analíticas con el
sólido pulverulento de la planta Parthenium
hysterophorus, Linn encaminadas a la obtención de una
forma farmacéutica de utilidad
antiparasitaria científicamente fundamentada, acorde a las
exigencias de normativas establecidas por el Centro Estatal de
Control de
Calidad de los Medicamentos (CECMED) y en Farmacopeas
internacionales, que garanticen de esta forma los requisitos de
calidad,
seguridad y
eficacia
exigidos al efecto.

Como requisito indispensable para desarrollar los
estudios de estabilidad del polvo de la planta y de futuras
formas de dosificación se requiere evaluar la
especificidad de la técnica de análisis cuantitativo propuesta para
desarrollar el estudio. Se demuestra en la
investigación que la Cromatografía Líquida de Alta
Eficacia (HPLC) para la cuantificación de partenina en el
sólido pulverulento del Parthenium hysterophorus,
Linn, es específica bajo las condiciones de trabajo
establecidas y puede emplearse en los estudios de
estabilidad.

Palabras claves: Parthenium hysterophorus, partenina,
HPLC, especificidad, estabilidad.

Especificidad de la técnica
analítica mediante Cromatografía Líquida de
Alta Eficacia (HPLC) para la estabilidad

Preparación de la disolución
patrón (150 mg/L)

Se pesó con exactitud 1,000 mg del patrón
partenina, aislada según se describe en el epígrafe
2.2, se enrasó con metanol en un matraz aforado de 2 mL,
se tomó una alícuota de 600 µL y se
enrasó con fase móvil acetonitrilo-agua (40:60)
en un matraz aforado de 2 mL.

Preparación de la disolución de la
muestra a
tiempo
cero

Se pesaron 0,1g de material vegetal y se colocaron en un
erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un
baño ultrasónico, durante 10 minutos. Se
filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se
repitió una vez más la extracción. Se
reunieron los filtrados, se concentró a vacío y se
redisolvió en 4mL de metanol. Se tomó una
alícuota de 1mL y se enrasó a 10 mL con fase
móvil acetonitrilo-agua (40:60) en un matraz
aforado.

Preparación de las disoluciones de
las muestras degradadas

▲ Medio oxidante: Se
pesó 0,1 g de material vegetal, y se colocó en un
erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un
baño ultrasónico durante 10 minutos. Se
filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se
repitió la extracción. Se reunieron los filtrados y
se la adicionaron 10 mL de peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3
%, se reflujó durante 1 hora, se tapó y se
protegió de la luz por 2
días, se concentró a vacío, luego se
redisolvió en 4 mL de metanol, se ajustó el
pH entre 7 y
8, se tomó 1 mL y se enrasó a 10 mL con fase
móvil (Acetonitrilo-Agua) (40:60) en un matraz
aforado.

▲ Medio ácido y básico: Se
pesó 0,1g de material vegetal, y se colocó en
erlenmeyer con 8 mL de metanol. La muestra se introdujo en un
baño ultrasónico durante 10 minutos. Se
filtró y se lavó con 3 mL de metanol, se
repitió la extracción. Se reunieron los filtrados,
se adicionó 10 mL de (HCl 1N, NaOH 1 N), se reflujó
durante 1 hora, se concentró a vacío, luego se
redisolvió en 4mL de metanol, se ajustó el pH entre
7 y 8, se pipeteó 1mL y se enrasó a 10 mL con fase
móvil (Acetonitrilo-Agua) (40:60) en un matraz aforado.Se
realizó la inyección de las muestras, previamente
filtradas por filtro miliporo de 0,45 µm y se inyectaron en
el instrumento 10 µL de cada una, bajo las condiciones
cromatográficas anteriormente.

• Cromatografía en capa delgada cualitativa
  (CCD)

Se realizó un seguimiento cualitativo mediante la
Cromatografía en Capa Delgada a las muestras sometidas, a
las diferentes condiciones degradativas (estrés)
epígrafe 2.6.1., en comparación con el comportamiento
cromatográfico de la disolución de referencia. Se
aplicaron 20 m L de cada variante
analizada, y del patrón de referencia y se emplearon las
condiciones cromatograficas descritas en el anteriormente Se
calculó la razón de flujo (Rf) de las manchas
obtenidas en los cromatogramas en comparación con la
disolución de referencia.

• Espectrofotometría
  ultravioleta

Muestra inicial a tiempo cero.

Se pesó con exactitud 250 mg de material vegetal
y se realizó una extracción con 10 mL de metanol,
agitando en máquina sacudidora durante 10 minutos y se
filtró. Se tomó 20 µL de la solución
anterior y se enrasó a un volumen de 2 mL
con metanol en matraz aforado. Se efectuó un barrido de
exploración en el intervalo de 200-300 nm. Se realizaron
las mediciones utilizando metanol como referencia.

Muestras degradadas (medio ácidos,
básicos y oxidantes).

Las muestras de ensayo
concentradas a sequedad se redisolvieron en metanol, se enrasaron
en matraces aforados de 2 mL. Se obtuvo la absorbancia en el
intervalo de 200 a 300 nm, empleando como blanco el
metanol.