Inducción del proceso Embriogénico en henequén. (página 2)

Partes: 1, 2

Análisis
estadístico

Para estos experimentos se aplicó un
diseño totalmente aleatorizado. Para los análisis
estadísticos se empleó el programa Statgraphics
Versión 5.1 (2000). Para cada población de datos se
analizaron que éstos cumplían la
distribución normal (Kolmogorov –Smirnov) y que
cumplían con la prueba de homogeneidad de la varianza
(Bartlett).

Los resultados se procesaron estadísticamente a
través de un análisis de varianza de
clasificación simple, con un diseño completamente
aleatorizado. Los datos en porcentajes se transformaron
según X = 2arcsin (X/100) 0.5. Para detectar la diferencia
entre las medias se realizó un ANOVA y la Prueba de Rangos
Múltiples de Duncan para el 5% de
significación.

Resultados y
discusión

Evaluación de la respuesta morfogénica
de explantes de henequén sembrados en altas
concentraciones de auxinas

En la Tabla 1 se puede observar que la
interacción entre los factores en estudio (tipo de
auxina-concentraciones) fue significativa. El mayor porcentaje en
la formación de callo primario se indujo cuando el
explante se cultivó sobre medio suplementado con 2,5 mg/L
y 5,0 mg/L de 2,4-D, tratamientos que se diferenciaron
significativamente del resto de los ensayados.

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a, b, c, Letras distintas difieren
estadísticamente para p<0.05

Tabla 1 Efecto del tipo de auxina y
concentración de esta sobre el porcentaje de la
formación de callo primario en explantes de
henequén.

En general, el porcentaje de explantes cultivados que no
formaron callos (explantes ennegrecidos, sin respuestas o
contaminados con bacterias y hongos) no superó el 40% para
la auxina 2,4-D por lo que se puede decir que el establecimiento
in vitro fue exitoso, sin embargo para el Picloram el
porcentaje de explantes cultivados que no formaron callos
(explantes ennegrecidos, sin respuestas o contaminados con
bacterias y hongos) superó el 60% lo que indica que esta
auxina a las concentraciones empleadas no ejerció una
respuesta comparable con el 2,4-D. Analizando el control el
porcentaje de cultivos sin respuestas alcanzó el 100%,
aspecto este que demuestra la necesidad de emplear reguladores
del crecimiento del tipo auxina combinado con citoquinina para
inducir la formación de callo en henequén. En la
mayoría de los medios de cultivos ensayados, fue factible
apreciar la formación de callo primario a partir de los 7
días de cultivo.

En la figura 1 se puede observar que, aunque la
formación de callo con estructuras embriogénicas se
indujo con ambas auxinas, el 2,4-D fue superior al Picloram, pues
en presencia de éste se produjo el mayor porcentaje de
explantes con callos con estructuras embriogénicas, lo que
demostró significativamente su superioridad.

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a, b, c, d, e Letras distintas difieren
estadísticamente para p<0.05

Figura 1. Comportamiento del
porcentaje de la formación de callos con estructuras
embriogénicas en hoja de plántula de
henequén cultivada in vitro.

En los resultados obtenidos con relación a las
concentraciones de reguladores del crecimiento utilizadas, se
encontró que la concentración en la que se produjo
el mayor porcentaje de explantes con callo con estructuras
embriogénicas fue la de 5,0 mg/L. Ello sugiere, que este
género responde mejor a concentraciones inferiores o igual
a 5,0 mg/L.

Con este resultado se evidencia que el 2,4-D fue la
auxina más adecuada para inducir la formación de
callo y la producción de agregados embriogénicos en
henequén, lo que se corresponde con lo planteado por
González, Alemán, Barredo y Robert (2002), de que
esta es la auxina más utilizada y efectiva para la
inducción de la embriogénesis somática en
una gran cantidad de especies.

Se observó que en la superficie del corte del
explante, a partir de las células meristemáticas,
se formó una masa de tejido de aspecto translúcido,
de color crema, nodular y muy friable, donde a los 60 días
se evidenció la presencia de callo sobre todo el explante.
Resultados similares se alcanzaron por Rodríguez-Garay
et al., (1996) quienes lograron inducir la
embriogénesis somática en la especie Agave
victoria-reginae Moore por medio de embriogénesis
directa a partir de la base de hojas de vitroplantas.

Está bien definido que el explante es el factor
fundamental que incide en la respuesta embriogénica de
diferentes especies (González, 2001), en este caso la
concentración de 2,4-D también ocupa un lugar
importante en la cadena de sucesos que definen la habilidad del
cultivo bajo condiciones in vitro de responder a la
formación de callos y su posterior diferenciación
en órganos y/o embriones.

Teniendo en cuenta que la embriogénesis
somática es un proceso eminentemente regulatorio, se
ratifica en este ensayo la importancia de la concentración
de auxinas para el crecimiento de los callos y la
formación de los embriones. Algunas células en
presencia de auxinas adquieren totipotencia, forman grupos
proembriogénicos y pasan a la etapa globular.

Con estos resultados se evidencia que tanto el tipo de
auxina como la concentración de la misma se relaciona
estrechamente con la formación de los callos con
estructuras embriogénicas en henequén, una posible
respuesta puede estar dada, porque este tipo de regulador del
crecimiento y su concentración afecta el tipo de
división y la polaridad de la célula, mecanismos
importantes en la formación de las células
embriogénicas (De Jong, Schmidt y De Vries,
1993).

También se piensa, que la aplicación
exógena de reguladores del crecimiento, probablemente
modifiquen la polaridad celular por interferencia del gradiente
eléctrico y del pH alrededor de las células (Smith
y Kricorian, 1990). Por lo tanto, ello indica, la importancia que
posee determinar el tipo y concentración del regulador del
crecimiento adecuado, para inducir el proceso
embriogénico.

Evaluación
de indicadores del crecimiento en callos de henequén
inducidos con altas concentraciones de auxinas

En la tabla 2 se puede observar que en la mayor
concentración de 2,4-D se produjo el mayor valor de masa
fresca la cual difirió estadísticamente del resto
de los tratamientos. En todos los tratamientos con la presencia
de 2,4-D se favoreció el incremento en masa fresca aunque
estos valores no se diferenciaron de la mayor
concentración de Picloram.

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a, b, c, d Letras distintas difieren
estadísticamente para p<0.05

Tabla 2 Efecto del tipo de auxina y
concentración de esta sobre la producción de masa
fresca en explantes de henequén.

La determinación de la masa fresca se establece
como un buen indicador para evaluar el efecto de las auxinas en
procesos fisiológicos ya que según Taiz y Zeiger
(1998) este tipo de regulador del crecimiento favorece la
adsorción o retención de agua la cual permite a la
célula mantener su turgencia y con ello la eficiencia en
su metabolismo.

Todo lo antes dicho se puede constatar con lo visto en
la tabla 1 donde los mayores porcentajes de explantes con callo
primario se alcanzan en las concentraciones de 2,4-D.

En la figura 2 se puede observar que la masa seca tuvo
un comportamiento similar entre el control y las concentraciones
de 2,5 y 5,0 mg/L de 2,4-D las cuales no se diferenciaron entre
ellas pero si lo hicieron con relación al resto de los
tratamientos. La mayor concentración de 2,4-D unido a los
tratamientos con Picloram presentaron los valores más
bajos de masa seca, los cuales no se diferenciaron
estadísticamente.

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a, b Letras distintas difieren estadísticamente
para p<0.05

Figura 2. Efecto del tipo de auxina y
concentración de esta sobre la producción de masa
seca en explantes de henequén.

Lo anterior sugiere que el Picloram a las
concentraciones utilizadas no favorece el incremento de masa seca
aunque tampoco se aprecia el posible efecto estimulador del
2,4-D. A pesar de ello, en presencia de 2,4-D se produce el mayor
porcentaje de callos con estructuras embriogénicas,
respuesta que no aparece en el control.

Se debe señalar la importancia de los valores de
masa seca como un indicador de calidad del tejido vegetal, pues
ésta se compone principalmente de lignina y
polisacáridos en la pared celular, además de
componentes del protoplasma como proteínas,
lípidos, aminoácidos, ácidos
orgánicos y algunos elementos inorgánicos como el
potasio (Castro y González, 2002).

El proceso de morfogénesis logrado en este ensayo
no es más que el resultado de una organizada
división y diferenciación celular con patrones
definidos, que depende básicamente de la actividad y
expresión de algunos genes. Este proceso está
íntimamente relacionado con múltiples factores que
son imposibles de definir aisladamente, ya que varían en
dependencia de los tipos celulares, tejidos, especies y
variedades (Ascon-Bieto y Talón, 2000).

Como fue posible comparar los efectos relativos de cada
regulador del crecimiento utilizado, se puede plantear que el
2,4-D produjo los mejores resultados pues las diferencias
encontradas en los medios con 2,4-D fueron relevantes al
compararlas con aquellos que contenían
Picloram.

Referencias
bibliográficas

1. Ascon-Bieto, J y Talón, M. 2000.
Fundamentos de Fisiología Vegetal. Ediciones
Universitarias de Barcelona, España. 522p
2. Castro, R. D. y González, O. 2002.
Eucalyptus (Eucalyptus grandis Hill ex Maiden)
micropropagation in a temporary immersion system. AGRICULTURA
TÉCNICA (CHILE) 62 (1):68 – 78.
3. De Jong, A.J.; Schmidt, E.D.L. y De Vries,
S.C. 1993. Early events in higher-plant embryogenesis. Plant
Mol Biol. 22: 367-377.
4. Garriga, M.; Alemán, S.y
González, G. 2006. Influencia del estado físico
del medio de cultivo y diferentes combinaciones de
reguladores del crecimiento sobre la formación de
brotes axilares en Agave fourcroydes Lem.
Artículo Científico Biotecnología
Vegetal Vol. 6, No. 1: 3 – 7, enero – marzo.
5. González, G.; Alemán, S.;
Barredo, F. y Robert, M. 2002. Embriogénesis
Somática en henequén. Revista
Biotecnología Vegetal. Vol. 2. No 1. pp. 3-8,
enero-marzo.
6. González, Oramas, G. 2001.
Embriogénesis Somática en Henequén
(Agave fourcroydes Lem.). Matanzas.117 h. Tesis (en
opción al grado científico de Doctor en
Ciencias Agrícolas) Ministerio de Educación
Superior.
7. Murashige, T. y Skoog, F. 1962. A revised
medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue
cultures. Physiol Plant 15:473-497
8. Robert, M.; Herrera, J.; Chan J. y
Contreras, F. 1992. "Micropropagation of Agave spp." In:
Y.P.S. Bajaj, (ed.) Biotechnology in Agriculture and
Forestry, Vol.19, Springer-Verlag, p. 306-329.
9. Rodríguez-Garay, B.; Gutierrez-Mora,
A.; Acosta, B.A. 1996. Somatic embryogenesis of Agave
victoriana reginae. Moore. Plant Cell, Tissue and Organ
Culture 4: p. 85-7
10. Smith, D. y Krikorian, A. 1990. Hormones in
tissue culture and micro-propagation. [en línea].
Disponible en: .
[Consulta: marzo 2009].
11. Taiz, L. y Zeiger, E. 1998. Plant
Physiology. Sunderland, Massachussetts.