Hipoxia & Teratogénesis. Factores prevalentes en concentraciones de plasma seminal en pacientes con Chlamidia

Objetivo: Determinar el comportamiento del Ph,,PO2 , gases, morfología y Teratogénesis . en poblaciones espermáticas. Contaminadas con CT..

Diseño: Se estudió una pareja multitratada con infertilidad durante la etapa reproductiva, con antecedentes de 4 procedimientos de baja complejidad ; analizando posibles causales analíticas masculinas.

Centro de Estudio: Consulta Externa Clínca Florida Satélite y Laboratorio para muestras especiales Hospital de Obstericia y Perinatología Rio de la Loza.

Introducción:. Se comenta el deterioro germinal por conceptos endógenos y exógenos, y especialmente se comentan los hallazgos encontrados en la gasometría del plasma seminal con dependencia en la morfología y movilidad celular.

Material y Métodos: Se procesaron las muestras seminales, realizándose los estudios de las muestras seminales en el Analizador de Gases ABL.330 Radiometer 1990, y se compara los resultados en estudios de elementos mitocondriales ,en células germinales .Cultivando las muestras para gram negativo . y se implementa la técnica de hibridación en fase líquida PACE–2. con especial intención en CT .

Conclusiones: Tanto la saturación de 02 en plasma seminal son cifras inferiores a la concentración arterial. El PH seminal fué de 7.41, con valores de 59.5 mmHG en P 02. Así mismo se muestran las modificaciones en SBC (Saturación Base Concentración) seminal con DEP =0.22910 pos tratamiento. Datos que repercuten en la morfología, como la dinámica celular. Comparándose, con la evaluación trans-membrana mitocondrial espermática, baja movilidad 12.1±7.1 vs. alta movilidad 8.0 ± 5.2 (P>0.004) Se valora el tratamiento convencional de Azitromicina reforzada con Doxaciclina. Siguiendo las indicaciones farmacológicas

Palabre Clave: Chlamidia Trachomatis en semen, causa de infertilidad. Gasometria seminal, valores predictivos

Hypoxia & Teratogenicity ; Prevailing factor in seminal plasma concentration as a fertility factor in patients with Chlamydia Trachomatis (CT). Analizys of one case

ABSTRACT

Objective: Determining the behaviour of Ph,,PO2, gases, morphology and Teratogenicity in spermatic populations contaminated with CT. Design: A couple suffering of infertility during the reproductive stage, treated multiple times, with four previous low complexity procedures was studied analyzing possible masculine analytic causals.

Center of Studies: Outpatient Office Florida Satélite Clinic and Laboratory for special samples, Obstetrics and Perinatology Hospital Rio de la Loza.Introduction:. Germinal deterioration by endogenous and exogenous concepts are discussed, in particular findings in the seminal plasma gasometry dependant on morphology and cellular mobility.  Material and Methodology: Seminal samples were processed, studied in Gas Analyzer ABL.330 Radiometer 1990, comparing the results to studies of mitochondrial elements in germinal cells. Cultivation of samples for gram-negative and the hybridization technique in liquid phase PACE-2 were implemented, intending to concentrate on CT"

Conclusions: attainment 02 saturation in seminal plasma are lower numbers to the arterial concentration. The seminal PH was 7.41, with values of 59.5 mmHG in P 02. Likewise, the modifications in SBC are shown (excess Base Saturation).  Data which has an effect on morphology as well as cellular dynamics. Establishing a comparison with the mitochondrial spermatic transmembrane assessment, low mobility 12.1±7.1 vs. high mobility 8.0 ± 5.2 (P>0.004). Conventional treatment of strengthened Azithromycin

Wirh Doxacyclin Foolowing pharmacological squema.

Key word: Chlamydia Trachomatis in semen, cause of infertility.—Seminal

Gasometry as predictive values.

.Historia

 En el siglo XX, como en ningún otro, se produjo una revolución sexual que permitió la perpetuación de infecciones clásicas que se transmiten por contacto sexual y la aparición de nuevos cuadros clínicos de muy complejo manejo.

Estas enfermedades conforman un enorme grupo de cuadros clínicos. Su frecuencia varía según el país, la edad de la población y su situación socioeconómica y cultural. Es conocido que la infección por VIH es muy alta en algunos países africanos. Sin embargo, no lo es tanto en otros. En Estados Unidos, la infección por Chlamidia, gonorreae,, herpes genital y la infección por virus papiloma constituyen las tres enfermedades de transmisión sexual más frecuentes

Chlamydia

es un género de bacterias gramnegativas perteneciente a la familia Chlamydiaceae,
orden Chlamydiales, filo Chlamydiae.

Castellanizado como "clamidia", y genéricamente entendido
como plural ("las clamidias") para hacer referencia a Chlamydia spp.,
la taxonomía y nomenclatura de este grupo es un tema controvertido sobre
el cual no existe un total acuerdo entre los expertos), así como tampoco
la forma de contagio. Con la información disponible en la actualidad,
taxonómica y sistemáticamente, el género Chlamydia incluye
tres especies: Chlamidia. trachomatis, C. muridarum y C. suis. (1 2,3, 4 .)

La Chlamydia, es un grupo de bacterias de tamaño pequeño, (en
relación a otras bacterias) y forma esferoidal. Su principal característica
es el ciclo replicativo intracelular, lo cual las convierte en parásitos
obligados.

Presentan una pared celular tipo gramnegativa (membrana externa), sin embargo,
el peptidoglicano está ausente o casi imperceptible (a pesar de tener
genes para su síntesis). Los principales antígenos de las clamidias
están presentes en la membrana externa, la cual contiene el lipopolisacárido
(LPS), la proteína mayor de la membrana externa (MOMP, del inglés
"Major Outter Membrane Protein") y otras dos proteínas ricas
en cisteína: una proteína de envoltura (62Kd) y una lipoproteína
(12Kd).

Tanto la MOMP como el LPS, son los componentes antigénicos más importantes.

Estas bacterias expresan un epitope lipopolisacárido específico de familia (ex epitope específico de género). Contenido G+C aproximadamente 40 mol%.

Introducción

La (CT) es una bacteria intracelular muy común en Estados Unidos de Norteamérica y en Europa, su frecuencia varía del 3 al 26%, su detección es difícil, ya que los medios de cultivo y las pruebas para su identificación son costosas y aún no se ha encontrado el estándar adecuado para usarse como prueba rutinaria. 5,6)

Es un padecimiento trasmitido por la relación sexual o por el contacto de mucosas con un sitio infectado, puede ser asintomática y generalmente tiende a la cronicidad invadiendo el epitelio cilíndrico del endocervix, endometrio y salpinges, produciendo complicaciones en la fertilidad, participando en forma importante en el embarazo ectópico, enfermedad pélvica inflamatoria y en otras áreas como la Bartholinitis. (7.8)

En la actualidad, algunas de las infecciones de declaración obligatoria (sífilis, gonorrea) son de menor incidencia, por ser detectadas y tratadas tempranamente con antibióticos, pero estas, han sido reemplazadas por otras nuevas (Chlamydia, Micoplasma y ciertos virus) que constituyen la segunda generación de organismos sexualmente transmitidos, más difíciles de identificar, tratar y controlar, con consecuencias fatales en la función reproductiva de hombres y mujeres. La estrategia mundial de la OMS sobre salud sexual y reproductiva tiene dentro de sus aspectos fundamentales, además de los servicios de atención a personas con problemas de infertilidad, combatir las ITS, las cuales se estiman en 340 millones de nuevos casos cada año, en hombres y mujeres en edad reproductive. (9)

Material y métodos

Las muestras seminales son tomadas en el laboratorio de muestras especiales del Hospital de Ginecología y Perinatología Río de la Loza, las gasometrias en plasma seminal, son comparadas con los valores estándar de muestras Arteriales y Venosas ( Testigos ) Tabla 1.

El sémen se obtuvo, habiendo cumplido un mínimo de dos días de abstinencia, por masturbación, Al ser colectadas, son procesadas para el estudio de gasometría seminal, morfología y dinámica celular, siendo requerimientos básicos para una posible capacitación.(10) 11) (12)

Empleándose para este efecto, la tinción de Schorr , Diff Quik Stein ,® Dade Behring y Papanicolaou, una vez obtenida la muestra se aguarda 1 hs. hasta obtener completa la licuefacción, acto seguido se procede a efectuarse el extendido laminar aguardando 24 hs. a intemperie ambiental 36o C., tiempo requerido para iniciar el proceso de tinción.

Los tiempos de tinción son de 18 segundos por colorante suspendido en agua en sus tres etápas. Finalizado los términos, y una vez obtenido el secado a intemperie de la lámina, se procede a efectuarse la lectura morfológica y movilidad celular.

En la Gasometría se utilizó el Analizador de Gases ABL 330 Radiometer año 1990. Previa licuefacción del plasma seminal de una hora, se procede a la lectura con la metodología habitual de una gasometría, sea venosa o arterial. Se describen los valores de saturación de 02 . además de los bicarbonatos. Con el potenciómetro integrado se leerá el PH .

La cámara de Makler de uso convencional, se usa para efectuar el estudio cuantitativo y su expresión dinámica de las células germinativas,

Tabla 1

VALORES REFERENTES

La correlación entre P02 y PH entre sangre Venosa y Arterial no difieren estadísticamente con el plasma seminal

Figura 1

Los hallazgos encontrados en 24 muestras testigos normales,

observamos una relación directa entre la concentración hiperbárica en PS, con la morfología y motilidad de las células germinales (NS.)

Gómez-Arzapalo VE, et al. Revista Mexicana de Urología Vol 68: Julio y Agosto No 4. 2008 – 215.

Obtención de las muestras uretrales masculinas

Se introdujo cuidadosamente un hisopo de alginato de calcio en la uretra a una profundidad aproximada de 3 a 4 cm y se realizó una rotación rigurosa del hisopo para desprender las células del epitelio, en seguida se depositó el hisopo en el medio de transporte específico del kit comercial PACE–2 (GenProbe, San Diego, CA, USA) y se conservó a –20 °C hasta su procesamiento.

Detección de Chlamydia trachomatis

El diagnóstico de infección por C. trachomatis se realizó mediante la técnica de hibridación en fase líquida PACE–2. La técnica se llevó a cabo de la siguiente forma: las muestras se descongelaron a temperatura ambiente por 15 min, se homogenizaron suavemente por agitación en vortex por 5 seg. En seguida 100 &µL de la muestra se depositaron en tubos de polipropileno de 12 x 75 mm. A cada tubo se le adicionaron 100 &µL de la sonda de DNA marcada con éster de acridina, la cual es complementaria al RNA ribosomal de C. trachomatis. Los tubos se incubaron a 60 °C en baño maría durante una hora. Al terminar la incubación, a los tubos se les adicionó un mL del reactivo de separación (esferas magnéticas que reconocen el híbrido formado de DNA–RNA). Los tubos se agitaron, se colocaron en una gradilla magnética y se incubaron a 60 °C durante 10 min. Finalizado el tiempo de incubación, los sobrenadantes fueron eliminados por inversión. Al botón obtenido se le adicionaron 3 mL de la solución de lavado, nuevamente los tubos se incubaron a temperatura ambiente sobre la gradilla magnética por 20 min.

RESULTADOS EN PLASMA SEMINAL CON: ITS ,CHLAMYDIA TRACHOMATIS

Tabla 2.

MORFOLOGIA

Tabla 3.

GASOMETRIA.

Figura 2

D S P .=.22910

La evaluación gráfica de las muestras seminales cosecutivas, Muestran la corrección de SBC, y P02 , se refleja en la DSP . Tabla 3

Figura 1

EVALUACIÓN MORFOLÓGICA

Se condensa la mejoría del Ph,, la Movilidad,, Morfología Tabla 2 y Tabla 3

Figura 2

Citologiía de Espermas, con células germinales
escencialmente normales 40x

Hemocolorante rápido hycel. 67 dias pos Tratamiento.

Muestra tomada al terminar tratamiento con Azitromicina, reforzada con Doxaciclina

Comentarios

El estudio de calidad del semen es el exámen de laboratorio más importante en la fertilidad masculina,(14) y es una de las prácticas que se efectúan en los servicios de atención a parejas infértiles, lo cual incluye movilidad, concentración, viabilidad, morfología y pH, siguiendo las normas recomendadas por la OMS.(15) A pesar de esto, muchas veces los resultados satisfactorios de estos parámetros seminales convencionales no se corresponden con los resultados que desde el punto de vista de fertilidad tienen estos individuos, por lo que clínicamente no son siempre suficientes para demostrar la función espermática y fertilidad masculina. El hecho de no encontrar alteraciones en los parámetros seminales no indica que la capacidad funcional de los espermatozoides no se encuentra comprometida, ya que tanto las bacterias, como sus productos y el incremento de la peroxidación de la infección, podrían ocasionar cambios bioquímicos y moleculares en la membrana espermática, que afectan la reacción acrosómica y su capacidad de fusión con el ovocito, así como daños en el ADN espermático.(16,17)

Las infecciones seminales en el hombre con frecuencia son de poca sintomatología, por lo que permanecen largo tiempo sin ser identificadas y generan secuelas que pueden conducir a la infertilidad. La asociación entre leucocitospermia y defectos morfológicos en los espermatozoides compromete no solo los eventos de fertilización de estos individuos, sino la implantación, e incluso, embarazo futuro, por lo que es necesario realizar estudios más profundos de morfología espermática.(18)

COMBINACIÓN MAS FRECUENTE EN ENFERMEDADES ITS

Figura 1

PAP al microscopio mostrando Chlamydia T en vacuolas. 500x

Figura 2.

Diplococo Gram negativo Intracelular

40x

Conclusiones y resultados

En nuestra muestra, los resultados obtenidos con las diferencias significativas en las tendencias de los grupos descritos (Ambiente con saturación de O2 y equilibrio en el comportamiento ácido-Base) , hacen ver un patrón de equilibrio entre Morfología. Movilidad, Volumen de plasma Seminal en los varones contaminados con la CT. Estas alteraciones comparadas con la misma muestra, después del tratamiento en la primera semana. Observamos una diferencial de DS. 0.01. Lo que nos hace suponer que el ambiente oxidativo bacteriano participa en la biogénesis celular seminal

Estudios in vitro coincubando esperma con esta bacteria muestran una declinación significativa en el número de espermatozoides móviles, e incluso, muerte prematura de estos,(19 )lo que pudiera contribuir al fallo de las técnicas in vitro.(20) Se recomienda introducir medidas de prevención y control de esta bacteria, en ambos miembros de la pareja que se consultan por infertilidad.(21)

Dentro de las perspectivas futuras a corto plazo, pudiera establecerse la implementación de métodos Gasométricos y cultivos adecuados conjuntamente a la información y educación en poblaciones con alto riesgo, especialmente en jóvenes,(22) que pasan inevitablemente por un período dinámico de cambios, sometidos a situaciones de riesgo, dentro de los cuales se encuentran las ITS,(23) cuyas consecuencias pueden originar infertilidad, y es precisamente en este período donde la prevención va a tener resultados favorables a corto y largo plazo en la salud sexual y reproductiva en las futuras generaciones. Se menciona el tratamiento establecido convencional, con la modalidad de reforzamiento,, cuyos resultados en lo general dependerán del momento en que se prescribe.

Referencias

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4 Everett KDE & Andersen AA: Radical changes to chlamydial taxonomy are not necessary just yet – reply, en International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology 51, 250, 2001.

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Autor:

Ernesto Gómez Arzapalo y V (1)

Clinica Florida Satelite )

QFB. Maria Inés Uribe Uribe"2"

Conrado Grados Garcia (3)

José Alfredo Villacorta Argaez."4

Hospital de Gineco-Obstetricia Río de la Loza