Cultivo invitro de Solanum nigrum “Tomatillo del diablo” con hormonas y sin hormonas
Resumen
El empleo del uso del Cultivo In Vitro de tejidos
vegetales es determinante para la producción a escala,
liberación de agentes extraños como metabolitos y
patógenos en tejidos vegetales.
Se realizó un Cultivo In Vitro de Solanum
nigrum usando un medio con hormonas, 3ppm de Acido Indol
Acetico (AIA ) y 0.3 ppm de Kinetina (KIN) y un medio sin
hormonas.
Las plántulas con hormonas mostraron mayor
desarrollo en las variables evaluadas. La aplicación de
hormonas a concentraciones de 3ppm de AIA y 0.3 ppm de KIN no
causaron efectos con diferencias significativos (p<0.05) en el
desarrollo de numero de hojas y tallo a diferencia de lo
planteado por Hillson.
El crecimiento y número de raíces
observadas en el estudio en plántulas con hormonas a
concentraciones de 3ppm de AIA y 0.3 ppm de KIN mostró un
incremento de crecimiento y numero de raíces con
diferencias estadísticamente significativas (p<0,05)
respecto a las plántulas sin hormonas, estos datos
corroboran el estudio realizado por Harrison .
El cultivo In Vitro sin hormonas para plantas como
Solanum nigrum podría emplearse cuando se realiza
el cultivo por semillas debido a que la semilla presenta AIA
estimulando naturalmente el desarrollo de raíces no siendo
necesario el uso de KIN para el desarrollo de tallos y hojas como
lo muestra el presente trabajo.
Palabras claves:Plantas,Cultivo,In
Vitro,Hormonas,Solanum nigrum
Culture InVitro of Solanum nigrum "Tomatillo
del diablo" with hormones and without hormones
Abstract
The use of the culture In Vitro in plant"s tissues is
useful for production of the tissues without
pathogens.
The culture In Vitro of Solanum nigrum was developed
using a medium with hormones, 3ppm of AIA and 0, 3 ppm of KIN and
a medium without hormones.
The plants cultured with hormones showed a high
development in the variables evaluated except in the leafs and
the stems compared with the plants cultured without hormones,
this result is opposite to obtain by Hillson.
The growing and number of the roots in the plants
cultured with hormones showed a significant difference
(P<0,05) compare the plants culture without hormones, this
result is similar to the obtained by Harrison.
The culture In Vitro without hormones in plants similar
Solanum nigrum could be used when the culture is based
in seeds because they have AIA stimulating naturally the
development of the roots ,thus is not necessary the use of the
KIN for developing of the leafs and stems related the results of
this work.
Key words:Plants,Culture,In Vitro,hormones,Solanum
nigrum
Introducción
Las capacidad de crecimiento de plantas en cultivos In
Vitro dependen del tejido a utilizar así como de la
especie, la formación de brotes y raíces de las
plántulas dependen del medio incluyendo las hormonas que
se utilizan en el mismo (Hamdi et al .1998).
Solanum nigrum (L) es una planta con un uso
potencial como insecticida y citotóxico.(Mansilla,2002)El
empleo de l uso del Cultivo In Vitro de tejidos vegetales es
determinante para la producción a escala ,
liberación de agentes extraños como
patógenos en los tejidos vegetales ,ya que en el
crecimiento In Vitro se da factores controlados es posible
estimular ciertos factores e inhibir otros a la conveniencia del
investigador.
Para la producción In Vitro es usual el uso de
hormonas como auxinas, citocininas y giberelinas.
En el presente trabajo comparamos el desarrrollo de
plantas en un tratamiento con hormonas y sin hormonas en el
cultivo In Vitro en Solanum nigrum (L),sabiendo la
enorme implicancia que es el no uso de hormonas , por que el
cultivo en costos se reduce notablemente ya que la
obtención de hormonas puras comercialmente es
caro.
El Acido Indol Acetico es la auxina mas abundante en la
planta sin embargo su biosíntesis no esta muy entendida.
(Glawiscnig et al.2000), las vías biosinteticas son
influidas a su vez por el medio ambiente y el estado de la planta
complicando el entendimiento (Glawiscnig et al .2000).
Estudios previos demostraron que el AIA en
concentraciones bajas actúan como estimulantes de
crecimiento, pero a altas concentraciones actúan como
inhibidores de crecimiento independientemente al etileno
(Eliasson et al. 1989).
La kinetina es una hormona usada en laboratorio esta
hormona estimula el desarrollo los brotes laterales e inhibe el
desarrollo de las raíces primarias en las proporciones
(KIN/AIA 10 -5 /10 -6 molar) mientras que concentraciones
(AIA/KIN 10 -5 / 10 -6 molar) causa los efectos
contrarios(Harrison,1998),en estudios previos se demostró
que la kinetina inhibe la elongación celular y estimula la
replicación celular(Hagen,1975),otra de las funciones
conocidas de esta hormona kinetina es el estimulo de la apertura
de estomas por inhibición de flujo iónico
(Hong,1975).
Existen reportes que kinetina inhibe la formación
de brotes florales pero estimula brotes vegetativos cuando esta a
mayor concentración que AIA en solanáceas (Hillson
et al.1977)
Metodología
-Se utilizo como fuente de carbono para el medio
azúcar rubia comercial 30 gr, como medio base se utilizo
10gr de agar, como fuente vitamínica se agrego 5ml de
complejo B,se agrego las sales hidroponicas(MnSO4
,FMA,Ca(NO3)2,FMK, KNO3 , KCl y sales menores) fueron agregadas
en un volumen de 5 ml cada solución salina .Las hormonas
utilizadas fueron 3ppm de AIA y 0.3 ppm de KIN a un pH de 5.7 y
C.E de 1.9mS.En un volumen final de 1 litro de solución
,finalmente la solución fue repartido en tubos de ensayo a
un volumen de 5ml para cada tubo en un lote de 48 tubos ,de
similar procedimiento se repartió en 48 tubos de ensayo
5ml de solución sin hormonas.
FMA=Fosfato Mono Amonico,FMK=Fosfato Mono
Potasico,AIA=Acido Indolacetico,KIN=Kinetina C.E=Conductividad
Electrica,Ph=Potencial de Hidrogeno.
-Se utilizaron plántulas crecidas In Vitro de 34
días.
-Se desinfecto la cabina UV en alcohol al
70%.
-Se prendió la cabina UV x 15 minutos.
-Se coloco los medios en los tubos de ensayo de 12 ml
con los medios esterilizados.
-Se cortaron las plántulas de los puntos axilares
con un bisturí estéril.
-Se desinfectaron los tejidos con alcohol al 70% x 1
minuto.
-Se desinfectaron los tejidos en Hipoclorito de Sodio al
1.2% x 10 minutos.
-Se enjuago 3 veces con agua estéril.
-Se colocaron los tejidos en una placa petri
estéril y se traspaso 48 esquejes por grupo con hormonas y
sin hormonas a los tubos de ensayo con medio.
-Se taparon los tubos con papel platino y
parafina.
-En todo momento se uso un mechero dentro de la
cabina.
-Se colocaron los tubos de ensayo en gradillas con un
fotoperiodo de 5pm-9am con una intensidad lumínica de 2000
lux a
25 °C x 18 días.
Resultados
Grafico 1 Muestra la media del desarrollo de las
plántulas en la que se observa un efecto retardado en el
tratamiento sin hormonas versus plántulas con hormonas,
mostrando mayor diferencia en el numero de
raíces.
Grafico 2. Los diagramas de caja, muestran
los percentiles de crecimiento de plántulas sin hormonas
versus plántulas con hormonas; el numero de hojas
mostró un comportamiento de desarrollo uniforme; en
contraste los tallos, raíz y numero de raíces
muestran comportamiento de crecimiento heterogéneo en
plántulas sin hormonas .
ANALISIS DE VARIANZA DE COMPARCION CON
EL TEST DE HOMOGENEIDAD ENTRE PLANTULAS CON HORMONAS Y SIN
HORMONAS
Tabla 1 En el análisis de varianza con el test de
homogeneidad entre plántulas con hormonas y
plántulas sin hormonas se observan diferencias
estadísticas significativas para el desarrollo de
raíces y numero de raices con un P < 0,05
Discusión
y Conclusiones
En el grafico 1 y tabla 1, se observa que las
plántulas con hormonas mostraron una tendencia mayor de
desarrollo en las variables evaluadas; la aplicación de
las hormonas a concentraciones de 3ppm de AIA y 0,3 ppm de KIN no
causaron efectos con diferencias significativos (p<0,05) en el
desarrollo de numero de hojas y tallo a diferencia de lo
planteado por (Hillson et al. 1977).
Se observo que el desarrollo de numero de hojas
mostró una tendencia uniforme en plántulas sin
hormonas en contraste a las plántulas con hormonas
(Grafico 2),caso contrario ocurrió respecto al
tallo.
El crecimiento y número de raíces
observadas en el estudio en plántulas con hormonas a
concentraciones de 3ppm de AIA y 0.3 ppm de KIN mostró un
incremento de crecimiento y numero de raíces con
diferencias estadísticamente significativas (p<0,05)
respecto a las plántulas sin hormonas ( Grafico 1yTabla 1)
estos datos corroboran el estudio realizado por (Harrison et al.
1980).
En el tratamiento de plántulas con hormonas se
observó un comportamiento de desarrollo uniforme de
crecimiento y numero de raíces de en contraste a las
plántulas sin hormonas (Grafico 2)
El uso de las hormonas a concentraciones de 3ppm de AIA
y 0.3 ppm de KIN para el presente estudio mostró
tendencias de mayor desarrollo en raíces (8, 11),en este
estudio se observo el antagonismo efectuado entre el AIA y la KIN
dependiente de las concentraciones.(8, 9 y 11).
Las concentraciones de 3ppm de AIA y 0.3 ppm de KIN
estimularon notablemente el crecimiento y numero de raíces
en plántulas con hormonas, asumiendo que este efecto se da
por las proporciones del AIA respecto a la KIN.
No se observó diferencias significativas en el
crecimiento de tallos y numero de hojas en plántulas con
hormonas versus plántulas sin hormonas.
Una conclusión del presente estudio muestra la
relevancia de usar auxinas como el AIA cuando se cultiva esquejes
In Vitro para la producción de raíces.
El cultivo In Vitro sin hormonas para plantas como
Solanum nigrum se podría emplear cuando se
realiza el cultivo por semillas debido a que la semilla presenta
AIA estimulando naturalmente el desarrollo de raíces no
siendo necesario el uso de KIN para el desarrollo de tallos y
hojas como lo muestra el presente trabajo.
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Anexos
Autor:
Jesús Rojas Jaimes,Fany Cardenas
F.
Laboratorio de Fisiología Vegetal
-Universidad Nacional Federico Villarreal
Calle San Marcos s/n-Pueblo
Libre
Lima,Perú