Propiedades hemaglutinantes de cepas de Escherichia coli aisladas de corderos diarreicos y su relación con su toxicidad
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RESUMEN: Se examinó el
contenido intestinal de 107 corderos neonatos muertos con el
objeto de aislar cepas de E. coli productoras de toxina
termoestable (ST) y verotoxina (VT) y también comprobar su
capacidad hemaglutinante.
Se aislaron 84 (78.5%) cepas de E. coli, 70
(83.3%) de ellas fueron hemaglutinantes de eritrocitos de
diversas especies de animales,
preferentemente de gallina, la mayoría de las cuales
resultaron ser manosa resistentes (HAMR). A su vez, se
logró el aislamiento de 18 cepas elaboradoras de ST y de
11 de VT, todas ellas con capacidad hemaglutinante, predominando
las de tipo HAMR.
Se recomienda hacer la prueba de hemaglutinación
y posteriormente pesquisar la estructura
antigénica y capacidad enterotóxicas de las cepas
aisladas, particularmente cuando se analiza un gran número
de cepas, con la finalidad de disminuir los costos de
diagnóstico, logrando una información preliminar de cepas
presumiblemente patógenas.
Palabras claves: E. coli,
hemaglutinación, diarrea,
cordero.
SUMMARY: Hemagglutinating properties of
Escherichia coli strains isolated from diarrheic
lambs.
The intestinal content of 107 neonatal dead lambs was
examined in order to isolate producers of thermostable toxin (ST)
and verotoxin (VT) E. coli strains. Besides, the
hemagglutinating properties were also tested.
Eighty four (78.5%) strains of E. coli were
isolated, 70 (83.3%) of which were hemagglutinating to red blood cells of different
animal species, mainly hen; most of them proved mannose resistent
(MRHA). Also, 18 strains ST producers and 11 VT producers were
isolated, all of them with agglutinating activity; the MRHA type
predominating.
It is recommended to run the hemagglutination test and secondly
to study the antigenic structure and enterotoxic capacity of the
isolated strain, particulary when a big number of strains is
analized, in order to decrease the diagnostic costs and to obtain
preliminary information on presumably, pathogenous
strains.
Key words: E. coli,
hemagglutination, diarrhea, lambs.
INTRODUCCIÓN
La infección intestinal por E. coli, tanto
en el hombre como
en los animales domésticos, es provocada por cepas que se
adhieren y colonizan las células
superficiales epiteliales del intestino delgado (Evans y col.,
1978, 1979), lo que logran por diferentes adhesinas, entre las
que destacan las fimbrias en las cepas enterotóxicas
(ETEC) (Evans y col., 1978, 1980b). Así, se describen
diferentes fimbrias que se encuentran presentes en cepas de
origen animal como K88 (F4) preferentemente en infecciones del
cerdo y las K99 (F5) en terneros y ovinos (Burrows y col., 1976;
Jones y Rutter, 1974; Arp, 1988). También se describen
cepas que exhiben fimbrias que tendrían una función
discutible como adhesinas de la mucosa del intestino delgado,
como acontece con los pilus tipo I (F1), las que pueden
diferenciarse de otras por ser hemaglutinantes manosa sensibles
(HAMS); en cambio las
cepas enterotóxicas presentan fimbrias que son manosa
resistentes (HAMR) (Evans y col., 1978; Arp, 1988).
En atención a que las propiedades
hemaglutinantes pueden corresponder a importantes factores de
virulencia, el objetivo del
presente artículo es dar a conocer la capacidad de
hemaglutinación de cepas de E. coli aisladas de
corderos neonatos diarreicos, relacionándolas con la
capacidad enterotóxica que exhiben.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se obtuvieron muestras del contenido intestinal de 107
corderos muertos menores de 30 días de edad que
presentaban diarrea. Las muestras se sembraron en placas de agar
eosina azul de metileno con el objeto de aislar cepas de E.
coli. De aquellas siembras en que se desarrollaron colonias
características de ser E. coli en más del
80% de la placa Petri (Schudel, 1985), se replicaron en agar
peptona para purificarlas, identificándolas posteriormente
por sus propiedades bioquímicas y
fisiológicas.
A las cepas que resultaron ser E. coli se les
estudió su capacidad de producir toxina termostable (ST),
verotoxina (VT) y sus propiedades hemaglutinantes. Para la
producción de ST se procedió como se
describió anteriormente (Zamora y col., 1994), con la
salvedad de que para la detección de la toxina en los
filtrados obtenidos se empleó la técnica de ELISA
de competencia,
usando kit elaborado por el laboratorio
Oxoid, Inglaterra. Para
la pesquisa de VT se siguió la misma técnica de
inoculación de los filtrados en monocapa de cultivo
celular Vero utilizada en 1994 (Zamora y col.,
1994).
Para determinar las propiedades hemaglutinantes, las
cepas se cultivaron a 37°C por 18 – 24 h en medio agar CFA
(Evans y col., 1979, 1980a) consistente en agar 2%, casamina
ácida 1%, extracto de levadura 0.15%, MgSO4 0.005% y MnCl2
0.0005% a pH 7.4 con la
finalidad de incrementar el desarrollo de
fimbrias. Los cultivos se suspendieron en PBS pH 7.2 a una
concentración de aproximadamente 109/ml mezclando sobre
una placa 20 µl de la suspensión bacteriana con una
gota (20 µl) de suspensión de eritrocitos al 3%
previamente lavados por tres veces en PBS. La placa se
agitó suavemente haciéndola rotar a temperatura
ambiente,
leyéndola dentro de un minuto. Para
examinar la especificidad de las hemaglutininas, cada cepa se
probó por separado frente a eritrocitos de gallina, bovino
y cobayo. Para detectar la sensibilidad de la hemaglutinina a la
manosa, se repitió la prueba con las cepas hemaglutinantes
suspendiendo, tanto las cepas como los eritrocitos, en D-manosa
al 1% en PBS pH 7.2 (Cox y Houvenaghel, 1987; Evans y col., 1978,
1979).
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