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Producción in vitro de embriones bovinos: suplementación de los medios de cultivo con suero


Partes: 1, 2

    Publicación original:
    Arch. med. vet., 2006, vol.38, no.2, p.97-104.
    ISSN 0301-732X.
    Reproducción autorizada por:
    Revista Archivos de Medicina Veterinaria

    SUMMARY: Techniques for producing
    bovine preimplantation embryos by in vitro maturation
    and fertilization, offers the potential for a large number of
    embryos at low cost to be used for basic scientific research
    (embryo development, transgenesis, cloning) or for commercial
    purposes. Embryo culture conditions can influence in
    vitro
    embryo development significantly, provoking deviations
    responsible for low quality compared with in vivo
    counterparts. In particular, serum supplementation alters both
    embryo morphology and quality and eliminating serum from the
    media could be beneficial to produce good quality embryos for
    cryopreservation and embryo transfer. The objectives of this
    review are to describe the general aspects of in vitro
    embryo culture and summerize some hypotheses about the way serum
    could alter embryo development and quality.

    Key words: in vitro production, serum,
    embryo quality.

    RESUMEN: Las técnicas
    para producir embriones bovinos, en estadios de
    preimplantación mediante la maduración de ovocitos
    y su posterior fertilización in vitro, ofrece la
    posibilidad de obtener embriones a bajo costo para ser
    utilizados con fines de estudio (desarrollo
    embrionario temprano, transgénesis, clonación) o con propósitos
    comerciales. Las condiciones de cultivo in vitro pueden
    influenciar significativamente el desarrollo
    embrionario, determinando cambios responsables de su menor
    calidad,
    comparados con los embriones producidos in vivo . En
    particular, la adición de suero a los medios de
    cultivo altera tanto la morfología
    embrionaria como su calidad, y su eliminación
    posibilitaría producir embriones de buena calidad para ser
    criopreservados y transferidos. Los objetivos de
    esta revisión son describir los aspectos generales del
    cultivo in vitro de embriones y resumir algunas hipótesis referidas a los mecanismos por
    los cuales el suero podría alterar el desarrollo y la
    calidad embrionaria.

    Palabras clave: producción in vitro, suero,
    calidad embrionaria.

    INTRODUCCIÓN

    Durante muchos años se ha trabajado buscando
    reproducir artificialmente los eventos de la
    maduración y fertilización ovocitaria, y el
    desarrollo embrionario temprano. Así, lo que en principio
    sólo tenía fines de investigación, en los últimos
    años se ha comenzado a utilizar con propósitos
    comerciales.

    Los resultados de producción in vitro de
    embriones en distintas especies fueron mejorando
    significativamente a medida que avanzaron los conocimientos
    acerca de sus requerimientos. Para ello, fue necesario
    transformar los medios de cultivo primitivos, muy complejos y
    suplementados frecuentemente con suero, en medios más
    definidos, en los cuales cada uno de sus componentes pudiera ser
    estudiado en función
    del efecto que genera sobre el desarrollo embrionario, su
    sobrevida poscriopreservación, la tasa de gestación
    y el porcentaje de crías viables.

    SISTEMA DE PRODUCCION IN
    VITRO
    DE EMBRIONES.

    El proceso de
    producción in vitro de embriones bovinos puede
    dividirse en tres pasos fundamentales, los cuales,
    independientemente del protocolo
    utilizado, en orden cronológico son: Maduración de
    ovocitos, Fecundación de ovocitos maduros, Cultivo de
    embriones.

    Estos tres pasos, comprenden una compleja serie de
    procesos
    fisiológicos, muchos de los cuales son aún
    desconocidos, condicionando cada uno per se el éxito o
    el fracaso del siguiente. Luego de la maduración in
    vitro
    , aproximadamente el 90% de los ovocitos inmaduros
    puestos a cultivar, alcanzan la metafase II y expulsan el primer
    cuerpo polar entre las 16 y 24 hs de comenzada la
    maduración. De estos, aproximadamente el 80% es fecundado
    y comienzan a dividirse, al menos, hasta el estadio de 2 a 4
    células. Sin embargo, sólo un 25-40%
    alcanza el estadio de blastocisto (B) o blastocisto expandido
    (Bex) luego del cultivo durante 6-7 días. Esto indica que
    el cultivo embrionario, correspondiente al paso más
    prolongado dentro del proceso de producción in
    vitro
    , es el período en el que se establece el mayor
    porcentajes de pérdidas del sistema. A su
    vez, durante esta etapa, se define en gran medida la calidad de
    los embriones obtenidos (Enrigh y col 2000, Rizos y col 2002,
    Galli y col 2003, Lonergan y col 2003, Lonergan y col
    2004).

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