Inmunogenicidad diferencial de dominios de las glicoproteínas de la envoltura del HTLV-I
Publicación original: |
RESUMEN: Mediante inmunoblot se
evaluó la reactividad de las glicoproteínas en
diferentes regiones de la envoltura viral de anticuerpos
presentes en el suero de individuos seropositivos para HTLV-I
provenientes del municipio de Tumaco. Se determinó que la
porción carboxilo-terminal de la gp-46 es la más
inmunodominante (aminoácidos 166-308), pues
presentó cifras variables de
reactividad de 80% a 100%. Esta región podría ser
una candidata potencial para desarrollar una vacuna con espectro
amplio a nivel mundial. Además, la región
comprendida entre los aminoácidos 166-201 de la gp-46 del
HTLV-I se reconoció en 100% de los sueros provenientes de
individuos con PET/ HAM (paraparesia espástica
tropical/mielopatía asociada con la infección por
HTLV-I ) y sólo en 80% de portadores sanos (p = 0.004),
diferencia que es estadísticamente significativa. Este
resultado permitió proponer que durante la
progresión de la enfermedad se presentarían cambios
funcionales en determinadas porciones de la proteína de
superficie de la envoltura, que de algún modo modula la
respuesta inmune humoral del individuo
seropositivo para HTLV-I.
Palabras claves: Glicoproteínas. HTLV-I.
Retrovirus. Infección viral.
SUMMARY: By Western Blot, the
reactivity of seropositive individuals from the town of Tumaco,
against different regions of the viral envelope glycoproteins was
evaluated. It was determined that the carboxyl end of the gp-46
(amino acids 166 to 308) had the maximum immuno-response with a
ratio of reactivity ranging from 80% to 100%. This region
represents a potential for developing a broad spectrum vaccine.
Furthermore the region between aminoacids 166-201 of the gp-46 of
HTLV-I revealed a compatible reaction with sera from 100% of
individuals with TSP/HAM (tropical spastic paraparesis/HTLV-I
associated myelopathy), in contrast, only 80% of sera from
asymptomatic individuals yielding a positive reaction, (p =
0.004) was observed. Based on these results, it is proposed that
during the progress of a viral infection, functional changes in
defined regions of the envelope glycoprotein would modulate the
immuno-response in HTLV-I seropositive individuals.
El virus
linfotrópico de células T
humanas tipo I (HTLV-I), es un retrovirus del grupo HTLV-BLV
perteneciente a la familia
Retroviridae1. Es el agente etiológico de la
leucemia/linfoma de las células T del adulto
(ATL)2 y de la mielopatía asociadas con el
HTLV-I (MAH)/paraparesia espástica tropical
(PET)3,4. Como algunas otras infecciones de tipo
viral, el HTLV-I se transmite por las vías perinatal,
sexual o sanguínea. Sin embargo, la historia natural de la
infección no se entiende muy bien. La epidemiología
de la infección en sí misma es altamente rara, pues
está marcada por la restricción geográfica y
un alto grado de microepidemicidad5.
En Colombia los
primeros casos de PET los informaron Zaninovic et al.6
y Arango et al.7 publicaron su asociación con
el HTLV-I poco después del informe de
Gessain et al.3 El foco de mayor endemia en Colombia
se encuentra en Tumaco, donde la prevalencia alcanza
0.098%8; sin embargo ha sido posible identificar focos
aislados en toda la Costa del Pacífico, donde el virus
infecta individuos de otras etnias9. Las
glicoproteínas de la envoltura de retrovirus tanto de
humanos como de animales, son
esenciales en los estadíos iniciales de la
infección viral. Potencialmente son las proteínas
más inmunogénicas de todos los antígenos virales10.
El gen ENV del HTLV-I codifica por una
glicoproteína de 62 Kd (gp62), que es la precursora de una
glicoproteína de superficie de 46 Kd (gp46) y una
transmembranal de 21 Kd (gp21)11. Se ha podido
demostrar que son los antígenos virales predominantes, los
que estimulan la producción de anticuerpos en los individuos
infectados con HTLV-I10.
Otra línea de evidencia sugiere que los
anticuerpos dirigidos contra estas proteínas pueden
neutralizar in vitro la formación de sincicios inducida
por HTLV-I12, además de neutralizar la
infectividad de un pseudotipo del virus de la estomatitis
vesicular que presenta las glicoproteínas de la envoltura
viral13.
Mediante el empleo de
proteínas producidas en sistemas
bacterianos (proteínas recombinantes)14-16 y
péptidos sintéticos17-19 que cubren
diferentes regiones de las glicoproteínas de la envoltura
viral, se ha podido establecer que la región más
inmunoreactiva es la mitad carboxilo-terminal; se ha demostrado
también que esta región se puede utilizar para
discriminar la infección de HTLV-I de la del
HTLV-II.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para comparar la reactividad de anticuerpos a diferentes
regiones de la gp62, se ensayaron 5 tipos de proteínas
recombinantes (PR) mediante la técnica de Western Blot. La
Figura 1 muestra las
diversas características de estas proteínas. La
técnica sigue básicamente los protocolos
descritos en Towbin et al.20 y Harlow y
Lane21. Las tiras de nitrato de celulosa se
incubaron en solución de bloqueo (albúmina
sérica bovina al 3% en PBS) durante 1 hora a 3º C.
Luego se hicieron 3 lavados de 5 minutos cada uno con
amortiguador de lavado (PBS pH 7.2, Tween
20 0.2%); cada tira se incubó con el suero del
correspondiente individuo obtenido de la población de estudio, en dilución
1:500 y se incubó durante una hora a 37º C con
agitación constante; se repitieron los pasos de lavados
antes de adicionar la anti-IgG humana biotinilada dilución
1:500 y se incubaron una hora a 37º C en agitación
constante. Luego, se adicionó el complejo
estreptavidina-peroxidasa de rábano en dilución
1:500 y se incubó por una hora más a 37º C con
agitación constante. Por último, las tiras se
revelaron con el sustrato 3,3' diaminobencidina (DAB)
tetraclorhidrato al 50% y 50 µl de
H2O2 y la reacción se dejó
proceder hasta la aparición de las bandas. Se
empleó la prueba de Fisher exacta para valorar las
diferencias de reactividad a cada proteína dentro de la
población en estudio.
Página siguiente  |