Vigilancia del dengue basada en el laboratorio: diferencias en el número de casos y virus aislados según la recolección del suero y la prueba serológica
Publicación original: |
RESUMEN: INTRODUCCION: El
control del
dengue depende
de los datos de la
vigilancia basada en el laboratorio.
El objetivo de
este estudio fue establecer las diferencias en número de
casos (IgM positiva) y serotipos del virus
según la estrategia de
vigilancia.
MATERIALES Y MÉTODOS: Se compararon los
resultados de dos estrategias de
vigilancia. Primera (SIVIGILA local): de 337 casos con sospecha
clínica de dengue se
colectó un único suero (agudo o convaleciente) que
se almacenó a 4oC. Se utilizó el estuche
UMELISA DENGUE (IPK, Cuba) para
detectar anticuerpos IgM y se hicieron intentos de aislamiento
del virus en células
C6/36. Segunda: de 318 casos sospechosos se colectaron sueros
pareados que se almacenaron a -70oC, se usó una
prueba local de MAC-ELISA y se intentó el aislamiento del
virus como en la primera. Algunos sueros procesados por el
MAC-ELISA se analizaron también por el UMELISA y los
estuches Dengue IgM-capture ELISA (PANBIO) e IgM*ELISA
anti-dengue (IPK, Cuba).
RESULTADOS: Se encontraron más casos IgM+
con la primera que con la segunda estrategia tanto con sueros
agudos como convalecientes. Esto es, 61.1 vs 22% (p<0.001) y
86.8 vs 49.3% (p<0.001), respectivamente. Los resultados del
MAC-ELISA concordaron 85% (k=0.29) con los del UMELISA, pero
90.4% (k=0.84 ) y 100% (k=1) con los estuches de PAMBIO e
IgM*ELISA, respectivamente. Se encontraron diferencias
significativas en la frecuencia del dengue en casos de la segunda
estrategia, cuando el resultado de la serología con suero
agudo o con pareado se comparó: 70 (22%) vs 155 (48.7%)
(p<0.001). El aislamiento viral fue más exitoso de los
sueros almacenados a -70oC que a 4oC: 17.8%
vs. 4.7% (p<0.001). Se identificaron los 4 serotipos del
virus. Se discuten la especificidad del UMELISA DENGUE y las
consecuencias en el control del dengue en relación a la
estrategia de vigilancia.
CONCLUSIONES: Se requiere evaluar la
especificidad del estuche UMELISA considerando la alta frecuencia
del dengue en casos con sospecha. El análisis de sueros pareados en la
vigilancia del dengue es necesario para obtener información confiable.
Palabras clave: Dengue; ELISA de captura;
Aislamiento viral; Serotipos virus dengue.
SUMMARY: BACKGRAUND: Dengue control measures
depend on the laboratory-based surveillance data. In this study
was investigated the differences in dengue cases and viruses
isolated in according with surveillance strategy.
STUDY DESIGN AND METHODS: Two surveillance
strategies were analyzed in this study. First (Local Surveillance
System): single serum sample (acute or convalescent) was
collected from 337 dengue suspected cases and then kept at
4oC. IgM antibodies were detected using UMELISA DENGUE
kit (IPK, Cuba), and serotypes identification was performed by
viral isolation attempts in C6/36. Second: paired serum sample
were collected from 318 dengue suspected cases and then kept at
-70ºC. IgM antibodies were detected using MAC-ELISA test and virus
isolation as above. Some paired sera analyzed by MAC-ELISA were
processed by "Dengue IgM-capture ELISA" kit (PANBIO) and
"IgM*ELISA anti-dengue" (IPK, Cuba).
RESULTS: More IgM+ dengue cases were detected by
the first than second strategy using acute or convalescent serum:
61.1 vs 22% (p<0.001) y 86.8 vs 49.3% (p<0.001),
respectively. Dengue diagnosis by MAC-ELISA was concordant in 85%
(K=0.29) respect to UM-ELISA, but 100% (K=1) and 90.4% (K=0.84)
respect to "IgM ELISA anti-dengue" and "Dengue IgM-capture ELISA"
kits. Differences in dengue cases detected by the second strategy
were found when serological result with single acute or paired
samples was compared: 70 (22%) vs 155 (48.7%) (p<0.001).
Dengue virus was isolated more frequently from sera kept at
-70ºC than those kept at 4ºC: 17.8% vs. 4.7%
(p<0.001). All virus serotypes were isolated. The UMELISA
DENGUE test specificity and relationship between impact dengue
surveillance and implemented strategy are analyzed.
CONCLUSIONS: The specificity of UMELISA DENGUE
test require to be evaluated by the high frequency of dengue in
suspected cases. Serum paired analyzes in dengue surveillance is
necessary to obtain reliable information.
Key words: Dengue; IgM-capture ELISA; Viral
isolation; Dengue virus serotypes; RT-PCR.
**********
El dengue es una enfermedad causada por cualquiera de
los 4 serotipos del virus del mismo nombre (DEN-1, DEN-2, DEN-3 y
DEN-4), que son transmitidos a los humanos por mosquitos del
género
Aedes1,2. En los últimos 25 años ha
emergido como la arbovirosis de mayor prevalencia en el mundo. Se
estima que cerca de 492,820 casos ocurrieron en las
Américas en la década de 1990 de los cuales
más de 77,000 fueron hemorrágicos, pero sólo
en el año 2002 se informaron 1’015,420 casos siendo
14,374 severos3,4. En Colombia, entre
1998 y 2003 se informaron 283,357 casos pudiéndose
clasificar 27,997 (9.8%) como hemorrágicos. De estos,
46,615 (16.4%) fueron en Santander (4,450 severos),
convirtiéndose en uno de los departamentos que más
casos informa al Ministerio de Salud y Protección
Social5-7.
Ante la carencia de tratamiento farmacológico e
inmunoprofilaxis, la
Organización Mundial de la Salud (OMS) definió
la estrategia global para el control del dengue que incluye,
entre otros componentes, la vigilancia basada en el
laboratorio8. Esta permite estimar el número de
casos confirmando la enfermedad en los sospechosos y conocer los
serotipos del virus que estén circulando. Lo primero se
hace rutinariamente por serología que detecta anticuerpos
IgM, siendo el MAC-ELISA el procedimiento
más utilizado9. Para esto es indispensable
analizar sueros pareados y demostrar seroconversión o
aumento cuádruplo del título del anticuerpo. Cuando
la serología se realiza en un único suero, el
resultado positivo indica un caso probable y no es confirmatorio,
porque los anticuerpos pueden ser de una infección pasada
reciente, pues la IgM permanece hasta por 90 días
después de una infección. Por otro lado, el
resultado negativo en suero de los primeros días de
síntomas no descarta el dengue porque en algunas personas
la concentración de la IgM es aún insuficiente para
encontrarse en el ensayo10,11.
La vigilancia de los virus forma parte del control del
dengue porque la entrada de un serotipo nuevo o la
reaparición de uno ausente por largo tiempo, se han
asociado con epidemias y aumento del dengue hemorrágico
(DH). La entrada del DEN-2 en Cuba en 198112,13 y la
reaparición del DEN-3 en Nicaragua en 199414,
produjeron las mayores epidemias de DH en América. El aislamiento del virus en
cultivo de células de mosquito y la posterior
identificación del serotipo con anticuerpos monoclonales,
ha sido el procedimiento utilizado de rutina para la
identificación de los virus. El éxito
del mismo depende del día de recolección y
preservación adecuada del suero9,15.
La vigilancia del dengue basada en el laboratorio en
áreas endémicas colombianas, incluido el
departamento de Santander, se realiza de forma pasiva. Esto es,
de cada caso sospechoso se recolecta un único suero, con
mayor frecuencia durante los primeros días de
síntomas cuando el paciente solicita la atención médica, el cual se remite
al Laboratorio de Salud
Pública de la Secretaría de Salud (LDSP) de
cada departamento. En esta dependencia las muestras se procesan
para buscar IgM y una alícuota se remite al Laboratorio de
Virología del Instituto Nacional de Salud (Bogotá)
para el aislamiento del virus. En tres de los departamentos donde
el dengue ocurre, la vigilancia de los serotipos se desarrolla en
laboratorios locales. Como las acciones de
control se fundamentan en la información obtenida de la
vigilancia basada en el laboratorio, los autores de este
artículo decidieron realizar este estudio. El objetivo fue
comparar la frecuencia de casos de dengue y el número de
virus aislados según dos estrategias de vigilancia que se
diferenciaron en los siguientes aspectos:
a. Número de sueros recolectados de cada caso
sospechoso (único o pareado) y momento de luego de inicio
de síntomas (agudo o convaleciente).
b. Almacenamiento
del suero (4oC ó -70oC) y
c. Protocolo del
MAC-ELISA (estuche comercial o prueba local).
Página siguiente  |