Selección de Aislamientos de Hongos Entomopatógenos para el Control de Huevos de la Polilla del Tomate, Tuta absoluta Meyrick (Lepidoptera: gelechiidae)
Publicación original: Agric. Téc.. [online]. jun. |
ABSTRACT: A pathogenicity study of 64 Metarhizium
anisopliae var. anisopliae and 70 Beauveria bassiana isolates
against tomato moth Tuta absoluta eggs, was carried out under laboratory
conditions. The first evaluation was accomplished by spraying suspensions of 107
conidias mL-1 of each isolate directly on eggs, through a Potter
tower. Mortality and conidia production on the eggs were significantly higher
with the isolates M. anisopliae Qu-M558 and B. bassiana Qu-B911,
Qu-B912 and Qu-B928. These isolates were newly evaluated using increasing
conidia concentrations (0 to 108 conidia mL-1) of each of
the five selected isolates. The isolates Qu-B912 and Qu-M558 produced the
highest mortality percentages based on the area under mortality progress curve
for each concentration, 80 and 60%, respectively.
Key words: biological control, insect
pathology, tomato moth.
RESUMEN: Se realizó
un estudio en laboratorio sobre la patogenicidad de 64 aislamientos de Metarhizium
anisopliae var. anisopliae y 70 de Beauveria bassiana, en
huevos de polilla del tomate Tuta absoluta. La primera evaluación se
realizó por aplicación directa de suspensiones de 107 conidias mL-1
para cada aislamiento, con el sistema de pulverización de la torre de Potter.
La mortalidad y esporulación sobre huevos fueron significativamente mayores con
los aislamientos M. anisopliae Qu-M558 y B. bassiana Qu-B911,
Qu-B912 y Qu-B928. Estos aislamientos fueron evaluados nuevamente en
suspensiones crecientes de 0 a 108 conidias mL-1. Los
aislamientos Qu-M558 y Qu-B912, produjeron los mayores porcentajes de
mortalidad sobre la base del cálculo del área bajo la curva del progreso de
mortalidad de huevos, 80 y 60%, respectivamente.
Palabras clave: control biológico, polilla del
tomate, patología de insectos.
INTRODUCCIÓN
En el desarrollo del
control biológico, los hongos entomopatógenos son los primeros agentes
biológicos en ser utilizados como control de plagas. Estos microorganismos
pueden infectar a los insectos directamente, a través de la penetración de la
cutícula, y ejercen múltiples mecanismos de acción, confiriéndoles una alta
capacidad para evitar que el hospedero desarrolle resistencia (Samson et al.,
1988; Alves, 1998).
Más de 90 géneros y 700
especies incluyendo subespecies, patotipos, cepas y aislamientos de hongos, son
conocidos por afectar los insectos (Bielikova et al., 2002). Las
especies más estudiadas y utilizadas en el mundo corresponden a Beauveria
bassiana (Bals.) Vuill. y Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorok,
evaluándose en diversos órdenes de insectos, incluyendo plagas de lepidópteros
de importancia económica presentes en Chile, como: Phthorimaea operculella,
Pieris brassicae, Dalaca pallens y Rhyacionia buoliana
(Hafez et al., 1994; Thomsen y Eilenberg, 2000; Cisternas et al.,
2002; Gerding et al., 2002).
En plagas como la polilla
del tomate, Tuta absoluta (Meyrick), el control de larvas se ve
dificultado porque se alimentan del mesófilo de las hojas o penetran en los
frutos, quedando protegidas de la acción de patógenos (Larraín, 1992). Una
alternativa a este problema es el control de los huevos, los que son ovipuestos
sobre la epidermis de hojas, tallos y frutos de la planta (Larraín, 1992),
quedando expuestos a la acción de enemigos naturales. Además, su control evita
la eclosión de larvas y el daño provocado en las plantas.
De acuerdo a lo anterior,
se realizó un estudio en laboratorio para evaluar la patogenicidad de 134
aislamientos de los hongos entomopatógenos (HEP) Metarhizium anisopliae
y Beauveria bassiana, pertenecientes a la colección del Instituto
Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIA), Centro Regional de
Investigación (CRI) Quilamapu, sobre huevos de la polilla del tomate Tuta
absoluta, de manera de establecer una estrategia de control alternativa a
las ya existentes.
MATERIALES Y MÉTODOS
Obtención de huevos
Las crianzas artificiales
de polillas utilizadas en este estudio se realizaron en los laboratorios de
entomología de. Instituto de Investigaciones Agropecuarias (INIA), Centro
Regional de Investigación (CRI) Quilamapu, Chillán. Adultos de T. absoluta
se mantuvieron en jaulas cubiertas con malla antiáfido, usando como sustrato
para la ovipostura hojas de tomate (Lycopersicon esculentum) con los
pecíolos inmersos en agua destilada para mantener su turgencia (Rodrigues et
al., 1999).
Origen del inóculo
Los aislamientos de M.
anisopliae y B. bassiana provinieron de la colección de HEP
perteneciente al Programa de Control Biológico del CRI Quilamapu de INIA, y de
una colecta de suelos realizada en lugares poco intervenidos y aledaños a
huertos comerciales de tomate de la zona de Quillota, V Región (32º56’ lat.
Sur; 71º14’ long. Oeste). Para extraer hongos desde las muestras de suelo se
utilizó el método del cebado descrito por Goettel e Inglish (1997), utilizando
larvas de la polilla de la cera (Galleria melonella L.).
Los aislamientos utilizados
se produjeron mediante siembras en placas Petri, con agar papa dextrosa, y se
incubaron a 25ºC hasta la esporulación del hongo. Las conidias se cosecharon
desde la superficie del cultivo, realizando una suspensión en agua destilada
estéril más 1% de humectante Tween 80 al 0,1%, y se llevaron a un agitador
mecánico para disgregar las conidias. La concentración de conidias se determinó
utilizando una cámara de recuento Neubauer (BOECO, Neubauer, Germany).
Pruebas de patogenicidad
Huevos colectados de las
crianzas se traspasaron con una aguja humedecida a folíolos de tomate
desinfectados con hipoclorito de sodio al 0,05% por 1 min y posteriormente se
lavaron con agua destilada estéril. Para evitar la deshidratación, el ápice
basal del folíolo se envolvió con algodón hidrófilo humedecido con agua
destilada. Sobre cada folíolo se colocaron 10 huevos de T. absoluta. El
inóculo consistió de una suspensión de 107 conidias mL-1,
aplicada sobre los huevos mediante una torre de pulverización Potter. Como
control se utilizaron huevos tratados con una solución de agua destilada con
Tween 80. Los huevos inoculados se incubaron junto con las hojas en placas
Petri y se mantuvieron a 20°C con ciclos de 12 h de luz y oscuridad.
El diseño experimental
utilizado fue completamente al azar con 134 aislamientos (70 B. bassiana
y 64 M. anisopliae) con dos repeticiones por aislamiento, utilizando 10
huevos como unidad experimental. La emergencia de larvas y la micosis sobre los
huevos se evaluaron diariamente desde el primer día de tratados. Los huevos sin
eclosión de larvas se trasladaron a cámaras húmedas y se incubaron a 20°C para
observar el posible desarrollo de micelio y conidias.
Los resultados obtenidos
se compararon utilizando test de Chi cuadrado múltiple sobre tablas de contingencia
de 2 x 2 (Gomez y Gomez, 1984), en base a la hipótesis que la proporción de
huevos muertos vs. huevos vivos es igual para cada tratamiento.
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