Micropropagación de eucalipto (Eucalyptus grandis hill ex maiden) en el sistema de inmersión temporal
ABSTRACT: A new procedure is
described for in vitro multiplication using the temporary
immersion system for plants (Eucalyptus grandis Hill ex
Maiden) coming from elite trees. The optimum multiplication
frequency was established at every 12 h with a duration of 3 min.
The additional application of a stream of fresh air every 6 h for
3 min diminished the hyper-hydration of the plants during the
process. The procedure involved two steps: shooting and
elongation of buds. The best treatment for induction of axillary
buds was obtained in the culture medium MS (Murashige and Skoog)
with the nitrates reduced to half strength plus 0.5 benciladenin
(BA) mg L-1, with volumes of 55.5 mL per group of buds
for three weeks. The elongation took place in the MS culture
medium plus indol butiric acid (IBA) 1.0 g L-1 for
three weeks. The use of this protocol allows producing an average
of 260 competent plants of E. grandis. Shoots taller than
2 cm were positively related with higher survival during the
acclimatization phase.
Key words: Eucalyptus grandis, temporary
immersion, micropropagation.
RESUMEN: Se describe un nuevo procedimiento para la
multiplicación in vitro mediante el sistema de inmersión
temporal de plantas de eucalipto
(Eucalyptus grandis Hill ex Maiden) procedentes de
árboles elite. La mayor
eficiencia de
multiplicación se estableció a una frecuencia
óptima de inmersión cada 12 h con una duración de
3 min. La aplicación adicional de un flujo de aire fresco cada 6 h durante 3
min disminuyó la hiperhidratación de las plantas
durante el proceso. Este procedimiento
comprendió dos pasos: la brotación o
multiplicación múltiple y la elongación de brotes.
El mejor tratamiento para la inducción de brotes
axilares o multiplicación se obtuvo en un medio de cultivo
MS con los nitratos reducidos a la mitad + 0,5 mg L-1
de benciladenina (BA), con volúmenes de 55,5 mL por grupo de brotes durante tres
semanas. La elongación tuvo lugar en el medio de cultivo de
Murashige y Skoog (MS) más ácido indolbutírico
(AIB) 1,0 g L-1, durante tres semanas. La
utilización de este protocolo permitió obtener
un promedio de 260 plantas competentes de E. grandis. Las
plantas con tamaño mayor a 2 cm se relacionaron
positivamente con una mayor supervivencia durante la fase de
aclimatización.
Palabras claves: Eucalyptus grandis,
inmersión temporal, micropropagación.
Introducción
La propagación vegetativa de los eucaliptos tiene
gran importancia en su mejoramiento para asegurar ganancias
genéticas inmediatas. Los clones superiores de eucaliptos
seleccionados cuidadosamente a partir de poblaciones naturales o
mejoradas, pueden ser propagados masivamente a bajo costo. Posteriormente, los
rametos de esos clones seleccionados podrán ser utilizados
directamente en plantaciones para asegurar que las
características superiores de crecimiento sean retenidas
(Vichnevetskaia, 1997). Esta tecnología está muy bien
establecida en algunos países como Brasil, donde de la producción anual en
viveros, es decir 175 millones de plantas, aproximadamente 30%
proviene de estacas enraizadas.
La micropropagación de eucalipto se ha desarrollado
en más de 55 especies, y en un gran número de
híbridos, utilizando técnicas convencionales de
organogénesis a partir de tejidos juveniles como
cotiledones y embriones, y de árboles adultos empleando
brotes epicórmicos, nudos y rebrotes como fuente de
explantes (Jones y van Staden, 1997). La aplicación a
escala comercial de estas
técnicas se ha visto limitada por factores tales como las
bajas tasas de multiplicación, calidad de los explantes, y altos
costos ocasionados por el uso
intensivo de mano de obra en las etapas de multiplicación y
enraizamiento (McComb y Bennett, 1986).
La automatización de una o
más etapas en los procesos de
micropropagación es una opción para la reducción
de costos de manipulación, reducción del espacio, e
incrementar volúmenes de producción. La
utilización de medios de cultivo
líquidos es una condición para lograr desarrollar esta
alternativa (Aitken-Christie et al., 1995; Kurata, 1995). Teisson
et al. (1996) desarrollaron un equipo sencillo de inmersión
temporal, cuyo nombre comercial es RITAÒ (récipient
à immersion temporaire automatisé), el cual ha sido
empleado para el cultivo de microesquejes y embriogénesis
somática en varias especies de interés hortícola, con
altas tasas de multiplicación, lo cual ha permitido
disminuir los costos de producción y
reducir riesgos de
contaminaciones.
En Cuba, a partir del desarrollo del primer sistema
semiautomatizado de inmersión temporal en 1997, se han
realizado investigaciones sobre la
aplicación de esta técnica en la proliferación de
meristemas de caña de azúcar (Saccharum spp.)
(Lorenzo et al., 1998), y micropropagación de piña
(Ananas comosus) (Escalona et al., 1999).
El objetivo de la presente
investigación fue evaluar
algunos factores críticos del proceso como son la
duración y frecuencias de inmersión, volumen óptimo de medio de
cultivo por explante, y duración de las fases de
proliferación y elongación que tiendan a optimizar la
producción y calidad de los brotes de Eucalyptus
grandis.
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