“Determinación del peso molecular de una proteína usando cromatografía por exclusión molecular. "

Objetivos:

* Utilizar el gel apropiado para eluir proteínas de peso molecular conocido y determinar su volumen de elución. * Determinar el peso molecular de una proteína problema por interpolación de su volumen de elución. * Mencionar las ventajas y limitaciones del método.

Introducción:
La cromatografía de exclusión molecular (a menudo también llamada filtración en gel) es una de las técnicas más sencillas de las empleadas en la separación de proteínas y ácidos nucleicos.
Este tipo de cromatografía se realiza en columnas cilíndricas rellenas con algunos de los geles que se fabrican con este fin (dextranos, agarosa o …ver más…

bovina | 24 | 24 | 1 | 66382 | 4.822 | Ovo albumina | 18 | 18 | 1 | 45000 | 4.653 | Problema | 18 | 27 | 1.5 | 24000 | 4.380 |

.

a) Cual fue el peso molecular estimado por interpolación de la proteína problema.
23553

b) Mencione cinco métodos para determinar peso molecular.
Electroforesis
Secuenciación

c) Mencione ventajas y limitaciones del método empleado. En cromatografía de exclusión por tamaños se encuentran dos tipos de rellenos, partículas poliméricas y partículas de sílice, con diámetros de partícula que oscilan de 5 a 10 m. Los últimos tienen la ventaja de una gran rigidez, lo que facilita el empaquetamiento; una mayor estabilidad, lo que permite el uso de una gran variedad de disolventes incluyendo el agua; una equilibración más rápida al cambiar el disolvente; y una buena estabilidad a elevadas temperaturas. Los inconvenientes de las partículas de sílice son su tendencia a retener solutos por adsorción, y su capacidad para catalizar la degradación de las moléculas del soluto.

Discusión:
Con ayuda a la dextrana azul 2000 se pudo determinar el volumen de vacio de la columna, se obtuvo el volumen de elución haciendo el perfil de elución de cada proteína patrón y del problema para determinar el peso molecular.
Fue necesario obtener la curva tipo ya que en esta se interpola el Ve/ Vo para obtener el peso molecular. Se puede