Extraccion de dna por tsnt

1403 palabras 6 páginas
Nombre del estudiante: Luis Felipe Torres Garza | Número de lista |
Fecha: 20 de agosto de 2012 | |

RÚBRICA DE EVALUACIÓN

| PUNTOS | PUNTOS ACREDITADOS |
FORMATO | 10 | |
OBJETIVO | 10 | |
FUNDAMENTO | 15 | |
MATERIALES Y EQUIPOS | 10 | |
PROCEDIMIENTO | 20 | |
RESULTADOS | 20 | |
RECOMENDACIONES Y CONCLUSIONES | 10 | |
BIBLIOGRAFÍA | 5 | |
TOTAL | 100 | |

Preparación de DNA genómico a partir de levaduras(Pichia pastoris) |
Fecha20 de agosto de 2012 | Elaborado por:Luis Felipe Torres Garza. | Páginas6 |

OBJETIVO

Aislar DNA genómico a partir de la levadura Pichia pastoris usando la técnica TSNT e interpretar los resultados a partir de corrimiento en gel de
…ver más…
| Puntillas estériles para micropipetas (azules y amarillas) |
| Contenedor para desechos físicos |

Material biológico, soluciones, medios de cultivo y reactivos
Cepa de P. pastoris pPic α-Glu, KM71 | Etanol al 100% |
Medio de cultivo YPD (Extracto de levadura 1%, Peptona 2%, Glucosa 2%) | Etanol al 70% |
TSNT (Tritón X-100 al 2%, SDS al 1%, NaCl 100mM, Tris-HCl 10mM y EDTA 1mM pH=8) | Etanol al 100% |
Fenol | RNAsa |
SEVAG (cloroformo: alcohol isoamílico, 24:1) | Solución amortiguadora de Tris-EDTA 1X(TE 1X pH=8) |
| Agarosa, buffer TBE, marcador Hiper ladder I |

PROCEDIMIENTO

1. Añadir al paquete celular 200μL de la solución amortiguadora de lisis TSNT, mezclar perfectamente por inversión o con pipeta.

2. Agregar 500μL de Fenol saturado y mezclar por inversión.

3. Agregar 100μL de cloroformo-alcohol isoamílico 24:1 (SEVAG).

4. Agitar en el vortex 5min.

5. Añadir 200 μL de TE 1X pH8 y mezclar por inversión de tres a cinco veces.

6. Precipitar con 1 mL de Etanol 100% y mezclar por…

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